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白血病是血液系统最常见的恶性肿瘤,白血病的发生发展与相关基因结构及功能的异常密切相关,探讨白血病高发家系特异性新基因变化与白血病发生发展的关系,有助于为白血病的特异性诊断与基因治疗提供有价值的科学根据。【目的】1.筛选、克隆出家族性急性髓系白血病致病相关基因,在分子水平上探讨家族性急性髓系白血病发生、发展的机制。2.在前期研究的基础上构建FAMLF蛋白真核表达系统,为今后进一步研究其蛋白质的结构及功能研究奠定基础。【方法】1.采用定位克隆策略,应用目前最先进的500K SNP基因芯片对一个急性白血病高发家系里的患者、高危个体、正常同胞和非血缘亲属进行全基因组基因分型。2.应用生物信息学分析等技术,结合相应的遗传学统计分析软件进行连锁分析、单倍型作图、拷贝数分析,定位出致病基因所在染色体区域;3.确定目标染色体区域内的候选基因;4.结合RT-PCR检测、筛选鉴定出在候选染色体区域内表达水平异常的致病相关新基因;5.用RT-PCR检测FAMLF在家系内外正常人、患者mRNA水平的表达情况;6.用生物基因工程技术构建FAMLF的真核表达系统。【结果】1.获得8位家系成员的全基因组的基因分型结果;2.对基因分型结果进行连锁分析与单倍型作图,获得了LOD值≥1.5并单倍型共享的SNP对应的基因共有21条;3.对基因分型结果进行拷贝数分析,获得拷贝数增加或减少SNP对应的基因共56条;4.对于拷贝数异常的SNP所对应的基因进行RT-PCR验证,获得结果与拷贝数分析的结果相一致;5.在23例急性髓系白血病患者与77例正常健康人对照实验中,FAMLF在急性髓系白血病病人中高表达,而在正常对照组低表达,该基因在77例正常人之中的表达是近似呈负偏态分布;6.成功地构建出FAMLF基因毕赤酵母真核表达系统并表达出FAMLF蛋白质。【结论】1.成功获得该家系连锁LOD≥1.5及单倍型共享的基因。2.成功获得该家系患者拷贝数异常的基因。3.SNP基因芯片技术是孟德尔遗传疾病致病基因定位的有效方法之一。4.SNP拷贝数分析可以发现拷贝数异常的基因。5.FAMLF在大部分急性髓系白血病病人中高表达,在正常人中低表达。6.成功地构建出FAMLF真核表达系统并表达出FAMLF蛋白。