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重症肌无力(myasthenia gravis ,MG)是一种典型的抗体介导、补体参与的器官特异性自身免疫性疾病,烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic Acetylcholine receptor ,nAChR)抗体是其发病的重要效应因子。临床表现主要为横纹肌无力,严重时可累及呼吸肌,危及生命。现有治疗手段主要为胆碱酯酶抑制剂、皮质激素、免疫抑制剂、血浆置换、静脉注射免疫球蛋白、胸腺切除术等,能一定程度控制病情,但不能抑制病程发展,且会影响全身免疫系统。致病性B细胞分泌产生AChR抗体,是MG发病的关键因子,若能从源头上清除这类B细胞则有望控制MG病情。本研究希望通过真核表达载体转染CHOk1细胞以获得一种AChR‐ IgG Fc融合蛋白,该融合蛋白可与分泌AChR抗体的致病B细胞表面抑制性受体FcγRⅡB或单核‐巨噬细胞表面的Fcγ受体特异性结合,抑制B细胞活化并促进其凋亡。以人nAChRα1亚基全序列为模板,以PCR法扩增AChRα1亚基胞外段主要免疫区基因片段Hα1-121 ,将其插入真核表达载体pAN1782。将构建的新载体转染至CHOk1细胞,建立稳定表达AChR‐ IgG Fc融合蛋白的CHOk1细胞株,以Western blot法检测AChR‐ IgG Fc融合蛋白表达。结果显示Hα1-121经PCR法扩增后所获428 bp基因片段大小符合预计结果,测序所得核苷酸序列与人类基因库中AChRα1亚基胞外段基因片段Hα1-121序列完全一致,未出现点突变或移码突变。所构建的新载体经酶切鉴定证实片段插入正确,载体构建成功。Western blot法检测结果显示转染新载体的CHOk1细胞培养上清液中有AChR‐ IgG Fc融合蛋白表达。综上所述,成功构建人AChR‐ IgG Fc段融合蛋白真核表达载体,且该融合蛋白可在转染新载体的CHOk1细胞中稳定表达,为下一步靶向B细胞治疗重症肌无力奠定了初步基础。EAMG是MG的动物模型,是研究MG发病机制、治疗策略的重要手段。我们采用重组表达的人肌肉AChR的α亚基(α1-210)ECD蛋白免疫雌性Lewis大鼠,观察免疫后大鼠的体重变化、行走、进食情况,抽取大鼠尾静脉血液,用ELISA法检测血清中AChR抗体滴度变化。该方法较传统建模方法简便快捷,EAMG模型的成功建立可为功能蛋白的检测以及MG发病机制、治疗方法的研究奠定基础。