Tollip在结肠癌生长转移中的促进作用

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目的:探讨Tollip对结肠癌的调控作用和意义。方法:收集结肠癌患者癌及癌旁组织标本各30例,免疫组织化学(IHC)、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫印迹法检测Tollip及相关因子TGF-β1、Smad、E-cadherin、Vimentin 的表达。将目的 RNA(Tollip-RNAi 及Tollip-RNA)通过慢病毒载体转染至结肠癌HT29细胞,构建Tollip差异表达的细胞,设立敲减组(KD)、过表达组(OE)、阴性组(NC)与空白对照组(CON)四组,MTT、CCK-8法和克隆形成实验检测Tollip基因表达不同的各组细胞增殖率,划痕实验测定各组细胞迁移能力。将培养的Tollip差异表达的各组结肠癌HT29细胞,注射到裸鼠皮下,构建肿瘤模型,绘制肿瘤生长曲线。在第4周处死全部裸鼠,比较各组裸鼠肿瘤平均质量和体积,并进行HE染色。结果:在结肠癌及癌旁肠黏膜组织细胞膜与细胞质上,Tollip呈弥散性表达,而在细胞核未见表达。免疫印迹结果显示结肠癌组Tollip的表达水平显著高于癌旁组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,Tollip在结肠癌组的表达显著高于癌旁组(P<0.05);Tollip 与 TGF-β1、Smad2、Smad3 的表达呈显著正相关(r=0.692,P<0.0001;r=0.480,P=0.032;r=0.520,P=0.006);与 Vimentin 及 E-cadherin 的表达无相关性(P>0.05)。Tollip在TNM分期中表达差异缺乏统计学意义(P>0.05)。RNA转染后,MTT、CCK-8法和克隆形成实验检测,在细胞增殖特性方面,KD组低于CON组(P<0.05),KD组与NC组缺乏统计学差异性(P>0.05);OE组高于CON组、NC组(P<0.05)。细胞划痕实验结果示细胞在运动迁移能力方面,KD组低于CON组(P<0.05),KD组与NC组缺乏统计学差异性(P>0.05);OE组高于CON组、NC组(P<0.05)。裸鼠成瘤测量肿瘤体积,KD组体积与CON组、NC组比较,缺乏统计学差异(P>0.05):OE组体积与CON组、NC组比较,在3和4周,肿瘤生长明显加快(P<0.05)。称重肿瘤质量,KD组重量与CON组、NC组比较,肿瘤重量明显减轻(P<0.05);OE组重量与CON组、NC组比较,肿瘤重量明显增加(P<0.05)。结论:Tollip促进结肠肿瘤的发生发展,Tollip与TGF-β1/Smad信号通路存在相关性,Tollip对结肠肿瘤有促进调控作用。
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