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目的：近几年研究表明,肿瘤干细胞可能是肿瘤恶性增殖的源泉,为化学药物治疗和放射治疗后肿瘤复发的主要原因之一,所以各种恶性肿瘤中肿瘤干细胞的识别和生物学特性的研究是当前研究的热点之一,积极探索并且发现有助于根治肿瘤治疗的分子标志物成为肿瘤干细胞研究的趋势。虽然目前已经从急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、脑肿瘤、非小细胞肺癌、黑色素瘤、前列腺癌和膀胱癌等多种类型的肿瘤组织中成功分离和鉴定出肿瘤干细胞,但肾癌中干细胞还没有被鉴定出来。本研究旨在证明肾透明细胞癌中罗丹明高染细胞亚群(Rhohigh)的肿瘤干细胞特性及其普遍性,并且从肾透明细胞癌组织中筛选、鉴别出肾透明细胞癌干细胞表面标志物。方法：临床上收集肾透明细胞癌新鲜组织,采用罗丹明(Rho123)染色后再经过流式细胞仪分选法,从肾透明细胞癌组织中培养细胞当中分选出Rhohigh和Rholow细胞亚群,并获得Rhohigh细胞亚群所占的比例；采用SILAC法对两类细胞亚群的膜蛋白进行质谱分析,根据蛋白质的不同表达水平,初步筛选表面标志物候选分子,然后采用针对候选分子的特异性抗体,用流式细胞术分析不同细胞亚群不同表面分子标志物的表达水平。结果：肾透明细胞癌新鲜组织经Rho123染色后,染色深浅不一,呈高低两个明显的亚群,Rhohigh细胞所占比例为16.34±1.08%,用流式细胞仪分选后,获得Rholow纯度为92.43%,Rhohigh细胞纯度为76.2%对Rhohigh和Rholow两类细胞亚群进行膜蛋白质谱分析(结果见附件Excle表)根据不同膜蛋白在Rhohigh和Rholow这两类细胞亚群中不同的蛋白表达谱,发现表达差异显著的表面分子有CD73、CD81、CD82、CD49c、CD315、CD249(Gp160)、CD26、CD54、CD222、CD36L1、CD36L2等。结合文献调研,初步筛选出CD73、CD81、CD49c、PTGFRN四种蛋白作为肾透明细胞癌干细胞候选表面分子标志物；进一步的流式细胞术结果显示CD49c和CD73特异性最高,有望成为肾透明细胞癌的特异性表面标志物。结论：Rhohigh亚群细胞在肾透明细胞癌组织中普遍存在；初步筛选出可能为肾透明细胞癌表面分子标志物CD73、CD81、CD49c、PTGFRN;其中CD49c和CD73特异性最高。