论文部分内容阅读
为了探讨冷应激反应中HSP70对有关炎症细胞因子的影响,以及HSP70、激素、炎症细胞因子三者之间的相互关系,本研究采用介导大鼠HSP70的重组腺病毒,通过尾静脉注入大鼠体内,建立HSP70过表达的大鼠动物模型,通过Western blotting方法检测大鼠体内各组织HSP70的表达情况,筛选出最佳病毒感染剂量和感染时间。随后进行冷应激试验。将270只12周龄SPF级雄性Wistar大鼠随机分为三组:(1)介导HSP70的重组腺病毒感染组(2)重组腺病毒空载体感染组(3)空白组。每个试验组分别设定:常温组(非冷刺激组)、急性冷刺激组和慢性冷刺激组。急性冷刺激组分为四组,分别给予时间为3h、6h、12h、24h的冷刺激;慢性冷刺激分为四组,分别给予时间为3d、6d、9d、12d的冷刺激;将空白常温组设为对照组。按照筛选出的最佳病毒感染剂量和感染时间作用于大鼠后,进行冷刺激试验。正常饲养温度为24±0.05℃,冷刺激温度4±0.05℃。到达冷刺激时间后,采用肌肉注射戊巴比妥钠(75mg/kg)麻醉大鼠,收集血液分离血清,利用Luminex xMAP技术检测多种细胞因子IL-2、TNF-α、IL-4、IL-6浓度,用ELISA方法检测激素ACTH和皮质酮浓度。结果如下:(1)筛选介导HSP70的重组腺病毒在体内感染的最佳剂量及感染时间,确定介导HSP70的重组腺病毒pAd-CMV-HSP70按照2.5×109 pfu/kg剂量感染大鼠4d后,HSP70可在肝脏、脾脏组织中过量表达,与对照组相比达到显著性水平(p<0.05)。(2)空白组、腺病毒空载体感染组,急性冷刺激期大鼠血清中TNF-α浓度显著高于对照组(p<0.05),介导HSP70的重组腺病毒感染组TNF-α浓度未发生显著性变化,慢性冷刺激期各试验组大鼠TNF-α浓度均恢复正常水平;空白组、腺病毒空载体感染组,急性及慢性冷刺激期IL-6与对照组相比均显著性升高(p<0.05),介导HSP70的重组腺病毒感染组,除慢性冷刺激3d时IL-6浓度显著升高外(p<0.05),其它冷刺激时间点IL-6与对照组相比无显著性差异。(3)空白组,急性冷刺激期3h、6h、12h和慢性冷刺激3d冷刺激大鼠血清中IL-2浓度与对照组相比显著升高(p<0.05)。介导HSP70的重组腺病毒感染组IL-2浓度在常温时显著高于对照组(p<0.05),急性及慢性冷刺激期均保持高浓度状态,显著高于对照组(p<0.05)。(4)空白组,急性冷刺激期3h、6h、12h,冷刺激大鼠血清中ACTH浓度与对照组相比均显著升高(p<0.05),慢性冷刺激期ACTH浓度显著降低(p<0.05)。腺病毒空载体感染组、介导HSP70的重组腺病毒感染组,在急性冷刺激期冷刺激大鼠血清中ACTH浓度与对照组相比均显著升高(p<0.05),介导HSP70的重组腺病毒感染组ACTH浓度显著低于空白组和腺病毒空载体感染组(p<0.05)。慢性冷刺激期,ACTH浓度变化,腺病毒空载体感染组与介导HSP70的重组腺病毒感染组相近;除急性冷刺激3h和慢性冷刺激12d,空白组大鼠血清中皮质酮浓度与对照组持平,其它冷刺激时间点空白组、腺病毒空载体感染组、介导HSP70的重组腺病毒感染组,皮质酮浓度均高与对照组(p<0.05)。急性冷刺激6h、12h,介导HSP70的重组腺病毒感染组皮质酮浓度均低于空白组、腺病毒空载体感染组,介导HSP70的重组腺病毒感染组与空白组间比较,皮质酮浓度较低,达显著性水平(p<0.05)。结论:研究结果提示,腺病毒介导的HSP70在肝脏、脾脏组织过表达后,可提高大鼠机体对冷应激的保护作用,主要通过抑制冷刺激大鼠促炎症细胞因子TNF-α、IL-6的分泌,降低冷刺激大鼠机体内炎症反应的发生;促进冷刺激大鼠血清中IL-2的分泌,增强冷刺激大鼠细胞免疫水平;并可抑制ACTH与皮质酮在冷刺激大鼠血清中的大量分泌,从而起到减轻冷刺激大鼠应激反应程度的作用。