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目的：通过原代培养SD新生鼠海马神经元细胞，观察高糖环境下神经元细胞形态、超微结构及应用Western blot检测MLCK及F-actin的表达改变，探讨高糖对神经元细胞MLCK表达及神经元细胞骨架的影响。 方法：1.海马神经元原代培养及纯度鉴定：在适宜条件下培养SD新生鼠海马神经元细胞，倒置显微镜下观察细胞的形态并用NSE免疫组化鉴定其纯度；2.高糖对海马神经元细胞形态及超微结构的影响：根据培养基中糖浓度不同，设立对照组和高糖组，其中含25mmol/L葡萄糖为常规培养神经元细胞的对照组，45mmol/L葡萄糖为高糖组，应用倒置显微镜、电子显微镜观察各组海马神经元细胞形态及超微结构；3.高糖对MLCK表达改变及其对细胞骨架影响：使用Western blot技术检测各组细胞内MLCK、F-actin表达，同时分析MLCK表达与F-actin表达的相关性，探讨高糖环境对MLCK及神经元细胞微丝骨架的影响。 结果：1.成功培养海马神经元细胞，倒置显微镜下观察培养7d的神经元形态成熟，体积较大，聚集存活，光晕明显；突起发达并向外延伸，互相连接形成密集交错的网络。经鉴定细胞纯度达90％以上；2.与对照组相比，高糖组海马神经元细胞突触缩短，超微结构显示细胞核形态不规则，细胞微丝骨架不完整；3.与对照组相比，高糖组细胞内F-actin表达降低（P＜0.05），MLCK表达增高（P＜0.05），且MLCK的表达与F-actin表达呈负相关关系（P＜0.05，r=-0.838）。 结论：1.高糖可以改变海马神经元细胞形态及超微结构；2.高糖改变海马神经元细胞形态及超微结构的过程中伴随有F-actin表达下降，提示神经元细胞微丝骨架发生了改变；3.高糖可诱导MLCK表达上升，且与F-actin表达有相关性，提示MLCK可能通过调节细胞微丝骨架来影响疾病的发生发展。