小分子RNA干预Notch1基因对肾癌透明细胞癌增殖的作用

来源 :泰山医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sky_bj
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目的探究Notch1在肾癌组织中的表达及与肾癌临床病理之间的关联。进一步探究Notch1在肾透明细胞癌中的表达含量,利用小片段RNA(siRNA)干预方法沉默肾透明细胞癌中Notch1的表达,并观测其对在肾癌Caki-1细胞增殖的意义。探索Notch1基因在肾癌发生发展中的临床意义。方法搜集52例肾癌组织与30例非癌肾组织标本,利用荧光实时定量PCR(RT-PCR)和免疫组化方式剖析正常肾组织与肾癌组织中Notch1基因的表达差别,分析Notch1与临床病理参数的相关性联系。人体正常HK-2肾小管上皮细胞和肾细胞癌786O细胞和Caki-1体外培养使用。经过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测Notch1mRNA和蛋白印迹法(Western blot)检测蛋白的表达。设立特异性Notch1-siRNA干涉肾癌Caki-1细胞,用Lip2000转染试剂转染48时小,经过荧光定量PCR和印迹蛋白法分别检测Notch1mRNA和蛋白的表达含量不同,CCk-8与克隆试验了解其增殖情行的变化。结果Notch1于肾癌组织中的表现高于非肾癌肾组织(为80.8%比40.0%,P<0.05)。Notch1的表达水平同样与肾癌的远处转移有关,发生转移的高于未转移的(P<0.05);直径≥7cm的癌中的Notch1含量要高于直径<7cm的肿瘤(P<0.05)。类似的,Notch1于肾癌细胞株中的含量要高于正常肾小管细胞,具备统计学差异(P<0.05)。干扰siRNA-notch1后可显著降低Caki-1细胞中Notch1mRNA和蛋白的表达,具有统计学差异(P<0.05),也检测出Caki-1细胞增殖本领的降低,差异也具备统计学差别(P<0.05)。结论Notch1在肾癌中高表达大概与肾癌发生发展有相关性。同时,Notch1与肾癌的临床病理分期分级和肿瘤大小均有关性。肾透亮细胞癌组织中Notch1基因高表达,Notch1信号通路的下调可抑制肾细胞癌Caki-1细胞发生,调控肾细胞癌,对肾细胞癌的诊断和治疗有一定的指导意义。
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