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疟疾仍然是一种严重危害人类健康的寄生虫病。由于抗药虫株以及媒介按蚊耐药性的不断发生和蔓延,世界疟疾形势日趋恶化,防制难度不断加大。因此,研制高效疟疾疫苗是控制和消灭疟疾的重要途径。虽然疟疾疫苗的研究进展迅速,已由传统的死疫苗和减毒疫苗发展到基因工程疫苗,亚单位疫苗。但迄今为止没有哪一种疫苗能真正有效地控制疟疾的流行与传播。研制多种抗原构成的复合疫苗(又称“鸡尾酒”)疫苗和新型疫苗佐剂是未来疟疾疫苗发展的新策略。 为了进一步提高疟疾疫苗的免疫原性和保护性,本研究将恶性疟原虫保护性抗原复合基因PfCMR与人白细胞介素-2(IL-2)基因在体外重组与高效表达,并对表达产物进行了生物学和免疫学活性鉴定。 用限制性内切酶EcoRI和SalI双酶酶切质粒pWR450-1/PfCMR,回收255bp目的基因片段PfCMR;用EcoRI消化质粒pBV220/IL-2,并去磷酸化。再将两者按10:1摩尔数混合在连接反应体系中连接。重组克隆用氨苄青霉素初筛,PCR扩增复筛。阳性克隆子再用内切酶进行酶切鉴定。结果得到正向插入的重组质粒pBV220/PfCMR-IL-2a,PfCMR基因与IL-2基因重组克隆获得成功,为恶性疟原虫复合抗原与IL-2的同时表达创造条件。 将重组质粒pBV220/PfCMR-IL-2α转化大肠杆菌DH5α,工程菌经30℃摇菌,42℃热诱导高效表达,用7M盐酸胍破菌,饱和硫酸铵沉淀、分离表达产物。经SDS-PAGE分析证实其分子量为25kDa与理论值相符合,表达产物占菌体总蛋白的37%。表达蛋白的IL-2活性高达5×10~5U/L。