心衰是一种复杂的临床综合征,其病情发展快,预后差,死亡率及再入院率高。其在儿童时期属于较为常见的急危重症,若未及时诊断治疗,可危及患儿生命。心衰标志物的监测对于心衰的早期诊断和及时干预尤为重要,响应于心室壁压力超负荷而增加分泌的脑钠肽已是国际公认的心衰标志物。化学发光免疫分析法、酶联免疫吸附测定和免疫层析法等多种方法已被报道用于脑钠肽的检测,但这些方法存在灵敏度不够或易受干扰等缺点。因此,本文基于纳米氧化石墨烯和羟基氧化钴开发了两种用于脑钠肽超灵敏检测的荧光适体传感器。本文的主要研究内容如下:第一部分:基于氧化石墨烯的荧光适体传感器用于脑钠肽的超灵敏检测为实现对儿童心衰的早期诊断,开发了一种用于心衰标志物?脑钠肽(BNP)超灵敏检测的荧光共振能量转移(FRET)平台。已可商业化购买、成本低、性质稳定的氧化石墨烯被用作能量受体,而荧光染料标记的核酸适配体被用作能量供体及BNP特异性识别元件。基于存在BNP时的FRET“开”的状态(强的荧光发射)和不存在BNP时FRET“关”的状态(荧光猝灭),实现了BNP的超灵敏检测,线性范围为0.074?0.56 pg/mL,检出限为0.045 pg/mL。为证明临床诊断的实用性,该FRET平台被进一步应用于45例疑似心衰患儿血液中的BNP测定。与临床常用的西门子方法(化学发光免疫分析法)相比,该方法能够提高心衰诊断的准确度和特异度,两种方法(本方法/西门子方法)的受试者工作特征(ROC)曲线下面积分别为0.869(95%CI:0.733?1.00,P<0.05)和0.850(95%CI:0.703?0.997,P<0.05),诊断的特异度分别为68.8%和65.6%。通过对BNP的超灵敏和特异性检测,该平台有望用于心衰的早期诊断。第二部分:基于羟基氧化钴纳米环和适配体的荧光共振能量转移平台检测脑钠肽以羟基氧化钴(CoOOH)纳米环作为能量受体,以荧光染料标记的核酸适配体作为能量供体及特异性识别元件,构建了用于BNP灵敏、特异性检测的FRET平台。当不存在BNP时,适配体能够吸附于CoOOH纳米环表面,两者间的能量转移导致染料的荧光猝灭。当添加目标蛋白BNP后,BNP与适配体通过特异性分子识别作用结合,适配体的构象改变,其在CoOOH纳米环表面的吸附被抑制,荧光恢复。基于上述原理,实现了BNP的超灵敏、选择性检测,线性范围为0.030?0.80pg/mL,检出限为0.030 pg/mL。在临床大样本(57例疑似心衰患儿的血液)的测定中,本方法显示出与西门子方法一致(Spearman秩相关系数r=0.92,P=0.00)的检测结果。在ROC曲线分析中,两种方法均具有较好的诊断准确性,曲线下面积分别为0.774(95%CI:0.573?0.974,P<0.05)(本方法)和0.829(95%CI:0.686?0.972,P<0.05)(西门子方法),但本方法能提高诊断的特异度(84.6%vs 61.5%)和阳性预测值(40.0%vs 20.0%)。该方法快速、灵敏度高、选择性好、成本低,可用于复杂血样中BNP的准确测定,进而实现对儿童心衰的早期诊断。