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骨肉瘤是儿童及青少年最常见的骨的原发性恶性肿瘤,其发生率为每百万人口中4至5例,各种族间无差异。目前临床治疗骨肉瘤的化疗药物仍以阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、和大剂量的甲氨蝶岭(MTX)为主,其他还有近年来应用的异环磷酰胺(IFO)等。虽然化疗明显改善骨肉瘤患者的预后,并且近年来骨肉瘤的治疗取得了一定进展。但近二十多年来骨肉瘤患者的5年生存率仍徘徊在60%上下。在过去的20年中,新的化疗药层出不穷,如肺癌在新药物的使用下疗效明显改善。但是少有发现抗骨肉瘤的新药。仅Navid F发现联合应用吉西他滨和紫杉萜治疗骨与软组织肉瘤转移患者,有良好的抗肿瘤作用及耐受性。因此,开发新的高效低毒的抗骨肉瘤药物或新的化疗增效药,是目前骨肉瘤治疗中的重要课题。小檗胺(Berbamine)是从小檗属植物的根茎中提取的一种药物。近年来,研究发现小檗胺对肝癌细胞(SMMC7721).宫颈癌细胞(Hela).白血病细胞(K562和HL-60)等都有抑制增殖作用,但是小檗胺对骨肉瘤作用的研究还未见报道。为近一步提高抗肿瘤作用,通过结构修饰化学合成了新型小檗胺衍生物BBD24。因此,本论文以小檗胺衍生物BBD24为切入点,旨在研究小檗胺衍生物BBD24体内外抗骨肉瘤的作用及其机制。MTT实验结果表明,BBD24能显著抑制骨肉瘤细胞系MNNG/HOS和MG63的生长,并且呈剂量依赖性和时间依赖性。进一步研究了BBD24对骨肉瘤细胞增殖抑制的分子机制发现,可以诱导骨肉瘤细胞发生凋亡、坏死和自噬。为了明确小檗胺类化合物在细胞内的分布,我们应用生物素标记的小檗胺和免疫荧光技术对小檗胺在人MNNG/HOS骨肉瘤细胞内的分布进行动态示踪和观察后发现,随着作用时间的延长,小檗胺的分布逐渐向细胞核周边的胞浆集中,并且48小时在细胞核内也可见红色荧光,提示小檗胺有可能进入细胞核内,发挥抗肿瘤活性。进一步对增殖相关的多个信号通路的研究发现,BBD24下调人骨肉瘤MNNG/HOS细胞Wnt/p-catenin信号通路和NF-κB信号通路。对BBD24和临床常用的骨肉瘤化疗药物顺铂联合作用骨肉瘤细胞系MNNG/HOS发现,二者具有协同作用。本实验收集了8例骨肉瘤患者原代标本,通过MTT测定后发现,小檗胺衍生物BBD24可以有效杀伤原代骨肉瘤细胞,且呈现明显的剂量依赖性,IC50基本在1.0-2.0μg／ml。我们同时收集了4例正常人外周血单个核细胞标本,BBD24对正常细胞的毒性实验提示IC50基本在8.0-10.0μg／ml,明显低于骨肉瘤患者原代细胞。小檗胺衍生物BBD24对裸鼠骨肉瘤移植模型的作用实验,以3×106／0.2ml细胞浓度接种于背部肩胛附近皮下,造模成功率为100%,接种24h后开始给药,给药时间及剂量为小檗胺衍生物BBD24 10mg／kg,灌胃,一天两次,连续给药20天。结果显示,BBD24可以显著抑制MNNG/HOS移植瘤,且对BALB/c-nu/nu裸鼠没有任何可见的毒副反应。本研究表明小檗胺衍生物BBD24具有显著地体内外抗骨肉瘤作用,提示其具有一定的临床应用价值和开发前景。