本文通过结合醇解、分子蒸馏、酯交换等多种方法对ω-3多不饱和脂肪酸的分离提纯工艺进行研究，验证酶法鱼油改性富集PUFA甘油酯工艺的可行性，得到工艺参数对富集效果的影响规律以及最优工艺参数组合，为酶法鱼油改性富集EPA和DHA甘油酯的工业化奠定基础。 采用醇解方法对原料鱼油进行处理，通过分析鱼油原料脂肪酸组成和含量及对其各项品质指标检测基础上，选用碱催化法对鱼油进行乙酯化反应。通过单因素实验，得到鱼油乙酯化工艺最优条件为：无水乙醇/鱼油反应物摩尔比为6：1，反应温度为80℃，反应时间2 h，碱催化剂浓度为0.3％，得到乙酯化得率为96％。 采用分子蒸馏法对醇解后的乙酯型鱼油进行分离，采用三级分子蒸馏工艺，适当提高温度和真空度，蒸去大部分轻组分脂肪酸乙酯，得到富含PUFA的乙酯型鱼油。其中EPA和DHA的总含量从原来的30.99％提高到80.57％。 采用酶法催化富含PUFA的乙酯型鱼油与三乙酸甘油酯进行酯交换反应，选用脂肪酶Novozym435做为催化剂，并在0.02大气压的真空度下进行反应。经过单因素实验，得出酶促合成PUFA甘油酯的较佳条件为：反应底物质量比(三乙酸甘油酯/PUFA乙酯)为0.3，反应温度60℃，脂肪酶加量为5％，摇床转速200 r/min，反应时间12 h。在此条件下进行优化实验，得到PUFA乙酯最大转化率为96.58％。