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Interleukin-17(IL-17)是由效应T细胞产生的一种前炎性细胞因子。IL-17与多种细胞活动有关,如刺激破骨细胞生成、粒细胞生成、在适当浓度的植物凝集素刺激下的T细胞增殖。目前对哺乳动物IL-17的免疫学功能研究相对成熟,而对家禽的IL-17研究相对较少。为探讨鸡IL-17(ChIL-17)的免疫学性质,本研究构建了原核表达鸡IL-17基因的重组大肠杆菌,获得相应的融合蛋白,并制备其特异性单克隆抗体。针对CWIL17的特异性单克隆抗体(McAb)可用于建立简单、快速、敏感性高的ChIL-17检测方法,同时为IL-17在禽类免疫系统中的免疫生物学研究提供有用的工具。1.ChIL-17基因的克隆、序列分析与原核表达根据GenBank上公布的ChIL-17基因序列设计引物,应用RT-PCR技术,以ConA刺激的SPF鸡脾脏淋巴细胞总RNA为模板反转录后扩增ChIL-17基因。将扩增产物构建到pMD18-T载体上经测序鉴定后,分别将目的基因插入原核表达质粒pGEX-6P-1和pET30(a)中,构建出重组菌BL21(pGEX-6P-1-ChIL17)和BL21(DE3)(pET-ChIL17)。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白His-ChIL17、GST-ChIL17与预期大小一致,两种融合蛋白均主要以包涵体形式存在。Western blotting试验结果表明融合蛋白具有良好的免疫生物学活性。本研究还扩增了麻鸭、青脚鸡、AA肉鸡、安卡鸡、雪山草鸡、狼山鸡、石岐杂鸡、龙溪麻鸡、青壳鸡、三黄鸡、乌骨鸡、仙居鸡、隐性白羽鸡等13个品种鸡和鸭的IL-17基因,其中SPF鸡与隐性白羽、AA肉鸡、三黄鸡、青脚麻鸡IL-17基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列完全一致；龙溪麻鸡、石岐杂鸡、雪山草鸡IL-17基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列完全一致。分析了它们之间的核苷酸和氨基酸的进化距离,结果表明各品系鸡IL-17基因核苷酸同源性在98%-100%之间,氨基酸同源性在95%-100%之间。SPF鸡IL-17与其他品系鸡的IL-17序列有0-8个核苷酸的差异,而氨基酸之间的差异最多只有3个。以上结果可以看出IL-17基因在不同种之间有着较高的种属特异性,但在同种不同属之间却高度保守,甚至在同属家禽的鸡鸭之间也相对保守。2.鸡IL-17单克隆抗体的制备与鉴定本研究以纯化的原核表达融合蛋白GST-CHIL17作为免疫原,并以纯化的融合蛋白His-ChIL17为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出2株稳定分泌抗Ch-IL17McAb的细胞株,命名为3E6.3E9。McAb免疫球蛋白亚类鉴定均为IgG1,3E6腹水效价为102,400, Western blotting分析显示,3E6单抗能特异性结合26kDa的His-ChIL17和46kDa的GST-ChIL17, Dot-ELISA试验表明,单抗3E6只与融合蛋白His-ChIL17和GST-CHIL17反应,而不与空载体蛋白反应,表明单抗是针对ChIL17的特异性单抗。本研究为进一步研究IL-17在禽类免疫系统中的免疫生物学研究提供有用的工具。