摘要：耳聋是造成人类残疾最常见的原因,我国现有听力言语残疾者达2780万人,居各类残疾的首位。目前全世界每1000个新生儿中就有一个先天性的聋儿,我国每年约有3万聋儿出生,其中60%为遗传性聋。在遗传性聋中,非综合征性聋约占70%,综合征性聋占30%。最常见的类型为常染色体隐性遗传性非综合征性聋,占非综合征性聋的比例约77%。目前已发现常染色体隐性遗传性非综合征性聋位点73个,相关基因40个。TPRN基因是2010年发现的一个主要表达在毛细胞静纤毛Taper区域的常染色体隐性遗传性耳聋79型(DFNB79)的致病基因,其表达产物为Taperin蛋白。为了解TPRN基因突变在中国人非综合征性聋人群中的分布情况和研究Taperin蛋白在听觉产生中的作用。本实验一方面采用耳聋基因芯片检测法和DNA直接测序法对耳聋患者进行TPRN基因突变的检测分析；另一方面构建TPRN shRNA质粒表达载体为下一步的TPRN基因体外抑制实验做准备。一.TPRN基因在中国非综合征型耳聋患者中的检测目的：研究TPRN基因在中国人非综合征性聋患者中的突变发生的概率、突变形式。方法：采用耳聋基因芯片对81名非综合征性聋患者进行耳聋基因检测,排除了常见的4个致病基因的9个位点后,采用DNA直接测序法对这81例耳聋患者和52例健康对照成员进行TPRN基因的检测。结果：81名耳聋患者中未发现已报道的TPRN基因突变；2名患者在1号外显子处发现携带有相同的TPRN基因杂合子突变559G>T,导致编码的氨基酸由丙氨酸变为丝氨酸(A187S),对照组中未发现相同突变。另外在患者和正常人中发现1号外显子处2个同义突变157C>T和318C>T。经氨基酸同源性分析得出A187S位于Taperin蛋白的高度保守区域内,而且在对照组未发现该突变,此突变可能与耳聋有关。结论目前发现TPRN基因突变在中国人非综合征型耳聋患者中整体发生频率较低,其功能有待进一步研究。二.TPRN siRNA质粒表达载体的构建和鉴定目的：构建TPRN siRNA质粒表达载体,为进一步的RNA干扰实验做准备。方法：设计并合成2组针对靶基因编码区的siRNA和1组阴性对照的siRNA,分别连接到pGenesil-2质粒载体上,并用PCR和酶切法对重组质粒进行鉴定。结果：重组质粒中已插入了目的基因片段。结论：成功的构建了和鉴定了TPRN siRNA质粒表达载体pGenesil-2-tprn-siRNA。