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目的IgA肾病是我国最常见的原发性肾小球疾病,也是导致青壮年病人进入尿毒症期的最主要病因,给国家和患者家庭带来了沉重的负担,因此明确IgA肾病的发病机制,提出针对性治疗方法尤为重要。目前基因芯片技术已被广泛应用于生物医学研究,为明确各种疾病的基因调控机制、研制针对性治疗方案提供了重要的技术支持。已有的多个大型研究利用基因芯片技术证实在IgA肾病患者中存在多种差异表达的基因,但各研究所提出的差异表达的基因和通路各有不同。本研究旨在从高通量基因表达数据库中提取、综合关于IgA肾病中mRNA差异表达基因的芯片数据,并利用深度测序技术,在IgA肾病患者外周血B细胞中验证mRNA差异表达的基因,并进一步分析这些基因与血清半乳糖缺乏的IgA1(Gd-IgA1)分子水平的相关性。方法从高通量基因表达库(GEO)中检索符合纳入标准的IgA肾病患者mRNA微阵列数据集,使用鲁棒多芯片平均算法(RMA)将原始数据标准化,合并不同套(different series)数据后,使用ComBat法去除批次效应,最后使用R语言v3.2.2分析处理数据。利用基因本体集(Gene Ontology,GO)、基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析解释差异表达基因的生物学意义。为验证微阵列数据分析所得结果,本研究纳入5例IgA肾病患者和3例健康志愿者,分离外周血B淋巴细胞并提取RNA,对RNA进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)后行深度测序,验证差异表达的基因。使用KM55试剂盒通过ELISA方法检测血浆中Gd-IgA1分子水平,利用Person检验分析所得的差异表达基因与Gd-IgA1分子水平的相关性。结果共3个IgA肾病患者mRNA微阵列数据集纳入最后分析。结果显示,共有655个基因差异表达(p<0.05),其中319个基因上调,另外的336个基因下调。通过GO富集分析得出这些mRNA失调基因主要与磷酸戊糖途径的非氧化分路、白细胞激活、蛋白激酶(protein kinase)、粘附斑等生理或病理过程相关,通过KEGG通路分析得出失调基因所富集的通路主要涉及肠道黏膜免疫、细胞自噬、线粒体自噬等。对5例IgA肾病患者和3例健康对照组B淋巴细胞中提取的RNA进行深度测序验证上述结果,发现有77种差异表达的基因与上述3个微阵列数据集的结果重合,重合的基因中有8种基因与Gd-IgA1分子水平相关,其中抑癌基因PTEN(gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)与Gd-IgA1水平相关性最强(r=-0.83,P=0.01)。结论微阵列数据分析结果表明,肠道黏膜免疫、肿瘤免疫及自噬等过程可能参与了IgA肾病的发生。进一步实验验证的结果提示,抑癌基因PTEN水平的下降可能介导了IgA肾病患者Gd-IgA1分子的产生。