普通菜豆抗旱新种质资源筛选及其离体再生体系构建

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普通菜豆起源于南美洲,是世界上栽培面积仅次于大豆的食用豆类作物,主要分布于亚洲、美洲、非洲东部、欧洲西部及东南部,在中国也有广泛种植。在我国农作物生产区内均可互相引种、栽培。普通菜豆是我国主要出口农产品之一,年出口量达100万吨。目前,国内学界对普通菜豆抗旱种质资源筛选和离体再生的研究较少。本研究首先以30份普通菜豆为材料,在实验室内模拟干旱胁迫,通过对芽期和苗期相关生理生化指标的相关分析,应用综合抗旱指数法分析了材料的抗旱能力强弱。然后,以筛选到的抗旱品种为材料,进行普通菜豆离体再生研究,构建了一条适合抗旱材料的离体再生体系,为抗旱材料转基因研究奠定了基础。主要获得以下研究成果。1.种子发芽率、植株地上部鲜重、地下部鲜重、叶片含水量、电导率和叶绿素荧光参数等抗旱相关指标在不同材料之间都具有明显差异,其中发芽率、地下鲜重、地上鲜重、全株鲜重、电导率和Fv/Fm的与综合抗旱系数的关联度均大于0.8,关系较为紧密,可以作为普通菜豆苗期抗旱性筛选的主要鉴定指标。2.应用模糊隶属函数法分析表明,棒豆(F3370)和英国红(F4845)的抗旱隶属值均大于0.6,为抗旱性较强的品种;抗旱性较差材料是大花金豆(F3260)、小杂豆(F0666)、四季豆(F0708)、红桩豆(F0671)、笔划豆(F3010)的抗旱隶属值均小于0.4,为水敏感材料。3.高浓度的升汞和长时间消毒,对普通菜豆种子萌发期间的污染有显著抑制效果,但会严重损伤种子,降低萌发率。用0.1%升汞消毒5 min时效果最好,其污染率为24%,萌发率为80.7%。4.基本培养基类型影响普通菜豆种子的萌发效果,在1×MSB5培养基中具有最高萌发率(83%),而1×MS和×B5培养基中的最高萌发率分别为76.7%和69.3%。5.激素对诱导胚尖和子叶节生芽起促进作用,在1×MSB5培养基中添加3.0 mg/L6BA,诱导子叶节生芽的效果最好,生芽率为73%。在1×MS培养基中添加1.0 mg/L6BA和0.5 mg/LNAA诱导胚尖可获得最高生芽率(81%)。6.不同外植体愈伤诱导成功率不同。在1×MSB5培养基中添加0.2 mg/L 6BA和3.0 mg/L 2,4-D时,下胚轴有最大愈伤诱导率(76.3%)。在1×MSB5培养基中添加0.3 mg/L NAA和1.0 mg/L 2,4-D时,子叶节有最大愈伤诱导率(28.7%)。在1×MSB5培养基中添加0.3 mg/L NAA和1.0 mg/L 2,4-D时,胚尖有最大愈伤诱导率(32.7%)。7.添加激素可促进胚尖不定芽和子叶节不定芽增殖起促进作用。在1×MSB5培养基中添加3.0 mg/L 6BA,诱导子叶节生芽的效果最好,增殖率为73%。在1×MS培养基中添加1.0 mg/L 6BA和0.5 mg/L NAA可诱导胚尖不定芽获得最高增殖率(81%)。8.不定芽转接到添加0.5 mg/L IBA和1.5g/L活性炭的0.5×MS琼脂糖培养基中,绝大部分不定芽可以生根。其中,胚尖不定芽最大生根率为81.3%,子叶节不定芽最大生根率为77%。
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