论文部分内容阅读
目的:筛选结直肠癌血清中特异表达的lncRNA,建立结直肠癌血清lncRNA诊断模型,并探讨该模型在结直肠癌诊断及预后监测中的临床意义。方法:1.初筛阶段选取6名结直肠癌患者,取其结直肠癌及癌旁正常组织进行基因芯片分析,筛选出结直肠癌与癌旁正常组织间差异表达的lncRNA。结合基因芯片结果及相关文献报道,选取候选lncRNA分子。2.确证阶段采用RT-qPCR技术,首先在80对结直肠癌及癌旁组织中对候选lncRNA分子进行验证,将其中存在显著性差异表达的候选分子在120名结直肠癌患者及120名对照者血清中进行进一步验证,最终确定在组织及血清中均存在显著差异表达的lncRNA分子。将确定的lncRNA分子带入多元logisitic回归分析,建立结直肠癌血清lncRNA诊断模型,采用受试者工作曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）分析结直肠癌血清 lncRNA 模型的诊断效能。3.验证阶段另选取120位结直肠癌癌患者和120名对照者血清,采用RT-qPCR方法再次验证上一阶段确定的差异表达分子,并评价血清lncRNA诊断模型在结直肠癌诊断中的诊断价值。同时对这120位结直肠癌患者和120对照者的血清标本CEA进行测定,比较血清lncRNA诊断模型与CEA在结直肠癌诊断中的效能。4.收集并分析验证阶段120名结直肠癌患者的预后信息。采用Kaplan-Meier分析对结直肠癌进行生存曲线分析,通过Cox比例风险模型分析可用于结直肠癌预后监测的独立预后因素。5.分析筛选出的lncRNA分子在组织和血清中表达量的相关性,并检测lncRNA分子的表达稳定性。结果:1.初筛阶段经基因芯片分析,共发现5873个差异表达的lncRNA（≥2个拷贝,p<0.05）。根据基因芯片分析结果及相关文献报道,共选取18个lncRNA分子,其中10个候选分子来自芯片结果,8个分子来自文献报道。2.在确证阶段,经RT-qPCR初次验证,4个lncRNA分子（BANCR,NR026817,NR029373和NR034119）在结直肠癌组织及血清中均存在显著差异表达（均p<0.001）,其中 BANCR 表达上调,NR026817,NR029373 和 NR034119表达均下调。采用ROC曲线评估BANCR,NR026817,NR029373和NR034119诊断结直肠癌的受试者工作曲线下面积（area under the ROC,AUC）,分别为0.638,0.708,0.812和0.724。通过Logistic多元回归分析建立基于4个lncRNA分子的结直肠癌血清lncRNA诊断模型,此诊断模型的AUC 为 0.891（95%CI 为 0.844-0.927,灵敏度为 81.67%,特异度为 80.00%）。3.验证阶段用RT-qPCR进行再次验证,结直肠癌血清lncRNA诊断模型AUC为 0.881（95%CI 为 0.833-0.919,灵敏度为 89.17%,特异度 75.83%）。其对TNM I、II、III期结直肠癌的诊断的AUC分别为0.774、0.844和0.949,明显高于 CEA 相应的 0.588、0695 和 0.861,（均 p<0.05）。4.Kaplan-Meier分析显示,低表达NR029373和NR034119结直肠癌患者较高表达患者的生存率低（p = 0.013和0.044）。多变量Cox回归分析显示,NR029373和NR034119可以作为结直肠癌的独立预后指标（p分别为0.013 和 0.038）。5.4 个 lncRNA 分子（BANCR,NR026817,NR029373 和 NR034119）在组织和血清中的表达量呈线性相关,且4个lncRNA分子在室温放置、反复冻融等处理后表达量稳定。结论:1.结直肠癌血清 lncRNA 诊断模型（BANCR,NR026817,NR029373 和NR034119）对结直肠癌早期诊断具有一定的临床意义。2.NR029373和NR034119或可作为结直肠癌监测的独立预后指标。