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目的Rap2B在肺癌组织中高表达。Rap2B表达量增高能够激活NF-κB通路以及MAPK亚通路P38活化。本研究拟通过RNAi技术沉默Rap2B基因,观察Rap2B基因被沉默后,细胞内NF-κB、p38在m RNA及蛋白质水平的表达以及细胞的克隆形成率、增殖能力、迁移能力、细胞凋亡和细胞周期的变化,探索Rap2B在肺癌的发生、发展过程中的作用,为将Rap2B作为一种治疗肺癌的高效、特异的生物靶标提供理论支持。方法1.以B(a)P为染毒物,染毒BEAS-2B细胞,构建恶性转化的BEAS-2B细胞系。设立空白对照组、二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)溶剂对照组、苯并(a)芘(Benzo(a)pyrene,B(a)P)染毒组。采用RT-PCR、Western blot技术检测各组Rap2B基因和蛋白的表达情况。2.小干扰RNA(Small Interfering RNA,si RNA)通过Lipofectamine TM2000转染恶性转化的BEAS-2B细胞,从3条si RNA序列中筛选出1条沉默Rap2B基因的最佳序列,RT-PCR验证其结果;观察Rap2B基因被沉默后,细胞内p65、p38在m RNA及蛋白质水平的表达以及细胞的克隆形成率、增殖能力、迁移能力、细胞凋亡和细胞周期的变化。结果1.恶性转化BEAS-2B细胞的建立经细胞形态学观察和软琼脂克隆形成实验,表明细胞发生了恶性转化。2.Rap2B在恶性转化BEAS-2B细胞中的表达B(a)P组Rap2B基因m RNA表达量高于空白对照组和DMSO组,差异均有统计学意义(均P<0.001);B(a)P组Rap2B蛋白表达量高于空白对照组和DMSO组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。3.细胞转染效率和Rap2B基因干扰效率的检测细胞转染6h后,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率为90.39%;干扰Rap2B基因效果最佳的si RNA为Rap2b-homo-814,干扰效率为82.3%。4.沉默Rap2B基因后细胞的增殖和迁移能力变化MTT法观察转染后各组细胞的生长状况:干扰Rap2B基因后能够明显抑制恶性转化BEAS-2B细胞的生长,与RNAi-组、NC组相比差异有统计学意义(均P﹤0.001);划痕实验检测Rap2B基因被干扰后恶性转化BEAS-2B细胞的迁移能力,RNAi-组和NC组平均间隙差异无统计学意义(P=0.739),而RNAi+组平均间隙与RNAi-组、NC组相比差异均有统计学意义(均P﹤0.001)。5.沉默Rap2B基因后细胞细胞凋亡和周期的变化RNAi+组细胞凋亡率与RNAi-组、NC组相比明显升高,差异有统计学意义(均P﹤0.001),而RNAi-组和NC组的凋亡率相比差异无统计学意义(P=0.226);RNAi+组G1期细胞百分比与RNAi-组、NC组相比明显升高,差异有统计学意义(均P﹤0.001)。S期细胞百分比与RNAi-组、NC组相比明显降低,差异有统计学意义(均P﹤0.001)。G2/M期细胞百分比与RNAi-组、NC组相比明显降低,差异有统计学意义(均P﹤0.001),而RNAi-组和NC组各期细胞百分比相比差异无统计学意义(P=0.820,P=923,P=0.791)。6.沉默Rap2B基因后p38、p65基因和蛋白的表达情况RNAi-组与NC组相比p38、p65基因m RNA表达水平差异均无统计学意义(P=0.612,P=0.408),而RNAi+组p38、p65基因m RNA表达量均明显低于RNAi-组和NC组,差异均有统计学意义(均P﹤0.001);RNAi-组与NC组相比p38、p65蛋白表达量差异均无统计学意义(P=0.158,P=0.111),而RNAi+组p38、p65蛋白表达量均明显低于RNAi-组和NC组,差异均有统计学意义(均P﹤0.001)。结论沉默Rap2B基因被后,可以使p38、p65基因和蛋白相对表达量降低,从而抑制NF-κB通路和MAPK通路的活性,从而减弱细胞的增殖和迁移能力,促进细胞的凋亡,将细胞阻滞于G0/G1期,细胞分裂明显减缓。