第一部分同种异基因大鼠胰十二指肠移植动物模型的建立目的建立稳定的大鼠胰十二指肠移植模型;为进一步研究核苷酸圈套技术抗同种异基因大鼠胰十二指肠移植排斥反应建立良好的技术平台。方法实验以SD大鼠为模型动物;采用袖套法作供受体间静脉吻合,两点固定法缝合动脉,供者十二指肠与近端空肠行侧侧吻合,成功地建立大鼠经肠系膜上静脉的门脉回流和内引流的胰十二指肠移植动物模型;统计受体大鼠术后生存时间,并常规病理检测术后移植胰腺病理变化。结果共进行大鼠胰腺移植实验65次。建立起稳定大鼠胰十二指肠移植动物模型,胰十二指肠模型移植后24小时存活率为87.7%,其中供体手术时间为40±3min,热缺血时间2±1min;受体手术时间55±4min,冷缺血时间50±2min;结论胰十二指肠模型移植稳定性好,是研究胰腺移植术后机体生化生理改变、免疫状态变化等的良好技术平台;第二部分NF-κB核苷酸圈套技术制备骨髓来源imDC目的体外诱导、培养大鼠(Lewis大鼠)骨髓来源改良树突状细胞(DC),为进一步研究核苷酸圈套技术抗同种异基因大鼠胰十二指肠移植排斥反应作准备。方法Lewis大鼠骨髓造血干细胞,体外经重组大鼠细胞因子GM-CSF、IL-4诱导成DC;NF-κB圈套寡核苷酸(NF-κB decoy ODNs)用于阻止DC的成熟,降低细胞表面分子的表达,制备imDC;LPS用于刺激DC的成熟。流式细胞仪检测DC表面分子MHC-Ⅱ、CD80、CD86等的表达情况,分析DC的细胞特性;结果体外GM-CSF和IL-4诱导的大鼠骨髓来源DC,纯度高、数量丰富。NF-κBdecoy ODN能够明显降低DC表面分子(MHC-Ⅱ、CD80、CD86等)的表达,表现为未成熟状态;经LPS刺激仍能保持未成熟状态。结论经NF-κB decoy ODN处理的大鼠骨髓来源DC,其状态稳定,低表达表面分子和共刺激分子第三部分超声介导NF-κB圈套寡核苷酸转染移植胰腺目的探讨超声介导的NF-κB圈套寡核苷酸转染大鼠移植胰腺组织的最适条件;为进一步研究核苷酸圈套技术抗同种异基因大鼠胰十二指肠移植排斥反应作准备。方法以SD大鼠为实验动物胰腺移植模型。将动物随机分为四组,生理盐水0.1ml+NF-κB decoy ODN 5OD经门静脉灌入供体胰腺,对照组:超声照射0 min;实验A组:超声照射0.5 min;实验B组:超声照射1 min;实验C组:超声照射2 min。完成前面实验后,进行下一步的分组实验:生理盐水0.1ml+NF-κB decoy ODN5OD经门静脉灌入供体胰腺,超声照射1 min,实验B组:0%SonoVue;实验D组:含10%SonoVue;实验E组:含25%SonoVue。检测分析术后第2天受体淀粉酶、移植胰腺组织荧光表达情况。结果实验C组受体术后血清淀粉酶较对照组、实验A组、实验B组明显增高(2220.3U/L±185.7U/L P＜0.05),而实验B组移植胰腺组织的荧光表达较对照组、实验A组明显提高(70.3±8.1 P＜0.05),与实验C组相仿;实验E组受体术后血清淀粉酶较实验B组、实验D组明显增高(2406.8 U/L±231.2U/L P＜0.05);实验D组移植胰腺组织的荧光表达较实验B组明显提高(88.3±10.1 P＜0.05),与实验E组相仿(P＞0.05)。结论在超声(2MHz)照射1 min、SonoVue浓度为10%的条件下,胰腺组织损伤小、转染率高;第四部分NF-κB核苷酸圈套技术制备imDC抗同种异基因大鼠胰十二指肠移植排斥反应的实验研究目的探讨由NF-κB decoy ODNs制备的受体骨髓来源imDC、超声-微泡造影剂介导的NF-κB decoy ODNs治疗移植胰腺以及两者联合运用抗胰腺移植急性排斥反应的作用机制。方法DA大鼠为供体、Lewis大鼠为受体作胰腺移植急性排斥模型;随机分为4组,每组(n=12)。(1)对照组:未作任何治疗;(2) ODN DCs处理组:移植胰腺植入后,经腰静脉输注入经NF-κB ODN处理的受体来源DC2×10~6(个);(3)ODN移植胰腺处理组:移植胰腺经NF-κB ODN处理(10%SonoVue,超声照射1min);(4)联合治疗组:移植胰腺经NF-κB ODN处理(10%SonoVue,超声照射1min),受体并经腰静脉注入经NF-κB ODN处理的受体来源DC2×10~6(个)。ELISA法检测细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10。移植后4天取胰腺、脾组织,常规病理观察排斥情况;TUNEL法观察移植胰腺、脾脏组织细胞凋亡情况;RT-PCR法检测移植胰腺内细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10mRNA的表达。作受体大鼠生存率的统计。结果ODN DCs处理组、ODN移植胰腺处理组和联合治疗组大鼠移植后生存期均明显延长,以联合治疗组最为显著。移植术后胰腺功能变化以ODN移植胰腺处理组和联合治疗组较轻。对照组移植术后外周血和移植物内细胞因子表达均增加;ODNDCs处理组、ODN移植胰腺处理组和联合治疗组移植胰腺内细胞因子IL-4、IL-10表达相对增高。移植术后4天,联合治疗组病理排斥反应较轻;对照组排斥反应明显。ODN DCs处理组和联合治疗组脾淋巴细胞凋亡明显;对照组胰腺细胞凋亡明显。结论NF-κB decoy ODN制备的受体骨髓来源imDC、超声-微泡造影剂介导的NF-κB decoy ODN处理移植胰腺均具有抗大鼠胰腺移植排斥的作用;两者联合运用具有协同作用,抗排斥作用明显。其主要的作用机制为:减轻缺血再灌注损伤、抑制由炎症因子介导的炎症和排斥反应;促进受体淋巴细胞的凋亡诱导特异性无反应性