太子参多糖口服液对脾虚大鼠肠道功能的影响

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目的:提取制备太子参多糖口服液并进行质量标准研究和稳定性考察;研究太子参多糖口服液对脾虚大鼠免疫功能、胃肠道生理功能、肠道菌群及其代谢产物的影响,同时从提取物、原药材和成方制剂三个层面研究其药理作用,对比探究太子参多糖是否为太子参健脾功效的有效部位。方法:(1)太子参多糖口服液制备及质量标准研究。提取太子参多糖并制备太子参多糖口服液,参照2020版《中国药典》建立太子参多糖口服液质量标准,并进行太子参多糖口服液的稳定性考察。(2)太子参多糖口服液对脾虚大鼠免疫功能的影响。SD大鼠皮下注射利血平复制脾虚模型。造模成功后,以四君子合剂为阳性药,研究太子参多糖口服液、太子参原药材和健胃消食片对大鼠体重、饮食、大便情况、精神状态、皮毛色泽等临床体征的影响,并测定免疫器官指数和SIg A、Ig G、Ig M、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量。(3)太子参多糖口服液对脾虚大鼠胃肠道生理功能的影响。测定各组大鼠D-木糖排泄率和淀粉酶活性,胃肠道激素GAST、MTL、VIP水平。观察空肠组织病理损伤情况,测量肠绒毛长度、隐窝深度、肌层厚度,并计算绒隐比均值(V/C)。(4)太子参多糖口服液对脾虚大鼠肠道菌群及其代谢产物的影响。从大鼠粪便中提取DNA,采用16S r RNA测序方法检测肠道微生物,同时采用GC-MS测定粪便中短链脂肪酸含量。结果:(1)确定太子参多糖口服液的制备工艺并建立了质量标准,稳定性良好。所得太子参多糖口服液为淡黄色澄明液体,味淡,微甜;太子参多糖口服液相对密度应不低于1.02g/m L;p H值应在5.0-7.0范围内;每m L太子参多糖口服液中多糖(以葡萄糖计)含量不得少于20mg;薄层色谱结果表明,主要单糖组分为葡萄糖和半乳糖;HPLC结果表明,太子参多糖口服液中含有0.013%鼠李糖、0.067%葡萄糖醛酸、0.063%乳糖、0.490%葡萄糖、1.656%半乳糖以及0.006%木糖;其余各项试验结果均符合相关规定。(2)造模后,各组大鼠体重和采食量下降(P<0.01),出现眯眼弓背,神倦乏力,大便溏泄,毛色枯黄等情况,说明造模成功;各给药组大鼠恢复较模型对照组更快。模型对照组免疫器官指数低于正常对照组(P<0.01),给药后免疫器官指数均有所上升,但除成方制剂组外,各组胸腺指数无统计学意义。模型对照组SIg A水平低于正常对照组(P<0.05),给药后除高剂量组外其余各组SIg A水平不同程度升高(P<0.01),说明太子参多糖的摄入可上调脾虚大鼠肠黏膜免疫功能。模型对照组Ig G、Ig M水平低于正常对照组(P<0.01),给药后中、高剂量组Ig G水平上升(P<0.01),除低剂量组外其余各给药组Ig M水平上升(P<0.01),说明太子参多糖的摄入可上调脾虚大鼠体液免疫功能。模型对照组IL-2、IL-6和IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.01);给药后,各组IL-2水平上升(P<0.01),低、中、高剂量组和原药材组IL-6水平上升(P<0.01),阳性对照和低、中剂量组IFN-γ水平上升(P<0.01),高剂量组TNF-α水平上升(P<0.05),说明太子参多糖的摄入可上调脾虚大鼠细胞免疫功能。(3)模型对照组D-木糖排泄率和淀粉酶活性低于正常对照组(P<0.05),给药后中、高剂量组、原药材组和成方制剂组D-木糖排泄率升高(P<0.05),成方制剂组淀粉酶活性升高(P<0.05),说明太子参多糖的摄入可明显改善脾虚大鼠的肠道吸收功能,健胃消食片可以明显改善脾虚大鼠的消化功能。与正常对照组相比,模型对照组GAST、MTL水平降低(P<0.01),VIP水平升高(P<0.01);与模型对照组比,各给药组GAST、MTL水平均有所升高(P<0.05),各给药组VIP水平均降低(P<0.01),说明太子参多糖的摄入可调节脾虚大鼠胃肠道激素水平。正常对照组空肠粘膜结构完整,未见明显病理损伤,模型对照组空肠粘膜上皮细胞坏死脱落,形成轻微糜烂,各给药组空肠状态明显改善;与正常对照组比,模型对照组空肠组织学评分升高(P<0.01);与模型对照组比,除低、中剂量组外,其余各给药组评分降低(P<0.05)。模型对照组绒毛长度和肌层厚度低于正常对照组(P<0.01和p<0.05),给药后有所改善,与模型对照组比,高剂量组和成方制剂组的V/C均值升高(P<0.01),说明太子参多糖具有一定肠粘膜保护作用,且健胃消食片效果最为明显。(4)每个样品平均得到有效焦磷酸序列95768条,按照97%的一致性聚类分析得到4054个OTUs,鉴定了279种微生物。与正常对照比,模型对照组肠道微生物多样性显著降低,肠道菌群紊乱,其中伊氏乳杆菌、约式乳杆菌、艾克曼菌、嗜酸乳杆菌、罗姆布茨菌、肠乳酸杆菌丰度降低(P<0.05),与模型对照比,各给药组肠道内上述细菌丰度均有所上升,说明太子参多糖、太子参药材和太子参成方制剂的摄入均可以影响脾虚大鼠肠道中的细菌,增加肠道微生物的多样性和丰富度,利于维持脾虚大鼠肠道稳态。大鼠粪便中含有乙酸、丙酸、丁酸和少量戊酸、己酸,模型对照组粪便中短链脂肪酸含量低于正常对照组;给药后高剂量组短链脂肪酸含量升高最为明显(P<0.01)。结论:太子参多糖口服液各项试验结果均符合2020版《中国药典》相关规定且稳定性良好;太子参多糖口服液可增强脾虚大鼠免疫功能,提高免疫器官指数,促进免疫球蛋白和细胞因子分泌;调节胃肠道生理功能,提高胃肠道激素水平,改善消化吸收功能;增加脾虚大鼠肠道微生物多样性,提高粪便中短链脂肪酸的含量,维持肠道内环境环境稳态。上述结果表明太子参多糖可调节脾虚大鼠肠道功能,具有益气健脾功效,是太子参多种药理作用的有效部位。
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