哮喘是由多种细胞和细胞组分共同参与的慢性气道炎症,伴有肺功能下降和气流受限。目前主要的治疗措施是消除气道炎症和缓解气道痉挛。在部分哮喘患者的治疗中,即使给予积极的抗炎和舒张支气管治疗后,患者气流阻塞和持续的气道高反应性仍不能被阻止,并出现肺功能急剧下降和激素抵抗。研究显示这种对治疗反应性下降及激素抵抗的主要原因是气道重塑。气道重塑主要表现为哮喘患者气道的病理改变,包括:上皮细胞脱落、粘膜下胶原沉积、平滑肌细胞增生肥厚、肌成纤维细胞增殖及粘液细胞过度分泌、粘液腺增生肥大。近年的众多研究一致认为转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)是哮喘气道重塑中最为关键的致纤维化细胞因子。Smad3蛋白(drosophilamothersagainstdecapentaplegic-3,Smad3)是TGF-β1信号转导通路下游的细胞因子,它促进Ⅰ型胶原的合成和分泌,在哮喘气道重塑中起重要作用。TGF-β1通过TGF-β1/Smad3信号通路起到刺激细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)的合成并抑制其降解从而促进粘膜下胶原沉积,也使其成为目前研究哮喘气道重塑机制的热点之一。近年来RAN干扰(RNAinterference,RNAi)技术在基因治疗及功能研究取得很大进展,RNA干扰是通过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA,与特定的RNA片段结合,引起目的基因的降解,沉默靶基因的表达。　　目的：本实验探讨针对Smad3基因片段的干扰RNA对SmadRNA和蛋白的沉默效果,及其对人肺成纤维细胞(humanlungfibroblast-1,HLF-1)合成I型胶原的影响。　　方法：设计并合成Smad3特异性小发卡干扰RNA(shorthairpinRNAs,shRNA),用脂质体2000(Lipofectamine2000)转染入培养的人HLF-1细胞,反转录聚合酶链反应(reversetransfectionPCR,RT-PCR)法和蛋白质印迹(Westernblot)法观察基因沉默效果,酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunoadsordentassay,ELISA)检测RNA干扰对人HLF-1细胞合成I型胶原的影响。　　结果：Smad3-shRNA成功转染入人HLF-1细胞并有效沉默Smad3的表达,RT-PCR结果显示Smad3-shRNA转染后Smad3mRNA表达与正常对照组和阴性对照组比较,分别降低68.2％和69.5%,差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot结果显示Smad3-shRNA转染后Smad3蛋白表达与正常对照组和阴性对照组比较,分别降低了67.1%和64.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示Smad3-shRNA转染后I型胶原为正常对照组和阴性对照组的59.3%和61.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。　　结论：Smad3-shRNA能有效沉默HLF-1细胞中Smad3mRNA和Smad3蛋白的表达,并减少HLF-1细胞I型胶原的合成。为进一步应用干扰RNA技术治疗哮喘患者气道重塑提供新的思路。