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目的:胆红素葡萄糖醛酸基转移酶( Bilirubin UDP-glucuronsytransferase B-UGT)是胆红素代谢的关键酶,其编码基因为UGT1A1。既往实验研究提示B-UGT活性降低可能是导致胆汁中单结合胆红素增多,形成致石胆汁的重要原因。本实验观察原发性肝内胆管结石(Primary Intrahepatic Stones PIS)患者肝细胞内胆红素葡萄糖醛酸基转移酶基因UGT1A1 mRNA及其蛋白(B-UGT)表达情况,在基因水平探索PIS的发病机理及调控机制 对象与方法:1、以肝内胆管结石病患者肝脏为标本,取33例肝内胆管结石患者肝脏(HS组),其中男性患者19人,女性14人。15例非PIS患者肝脏(其中肝囊肿患者8人,肝血管瘤6人,肝癌1人,男性9人,女性6人)为对照组(NS组)。在术中将肝组织切下后,立即切除适当大小装入冻存管,急送泸州医学院附属医院中心实验室-80度保存。2、肝脏细胞内UGT1A1基因mRNA表达量测定:以GAPDH为内参照,采用Real time PCR方法检测(SYBR Green相对定量法)UGT1A1基因 mRNA的表达量。上游引物序列为TGCCCACTGTATTCTTCTTGC(5’-3’),下游引物序列为TTCTGTGAAAAGGCAATGAGC(5’-3’)。根据标准曲线和样本 PCR反应Ct值,用Bio-Rad iQ5软件分析计算mRNA表达量。3、UGT1A1基因蛋白(B-UGT)表达量的检测:以β-actin为内参,抗体选择美国ABCAM公司产品UGT1A1(AB62600),采用Western blot法检测上述基因所编码蛋白表达量。图像结果使用Bio-Rad凝胶摄像分析系统及Quantity One4.4.0软件分析计算相关蛋白的表达量。检测术前患者空腹12小时以上血清生化指标:总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆固醇、甘油三酯、总胆汁酸、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白 结果:1、血清生化指标分析:HS组血清总胆固醇、甘油三酯、总胆汁酸、高密度低蛋白、低密度脂蛋白、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素均低于对照NS组,但差异无统计学意义。2、HS组UGT1A1mRNA表达量为10.246±2.151,NS组为1.000±0.242,HS组UGT1A1mRNA表达量显著高于对照组,t=2.89,P=0.018;3、HS组UGT1A1蛋白(B-UGT)表达量为1.059±0.232,NS组为0.835±0.007,HS组 UGT1A1蛋白(B-UGT)表达量高于对照组,t=2.487,p=0.020。3、PIS患者UGT1A1基因 mRNA表达量与蛋白(B-UGT)表达量呈正相关(r=0.996, P=0.000),相关系数有统计学意义。血清胆固醇、总胆汁酸、总胆红素、间接胆红素、高密度脂蛋白以及低密度脂蛋白与 mRNA、蛋白(B-UGT)表达量呈负相关,但相关系数无统计学意义(r<0,P>0.05)。甘油三酯及直接胆红素与mRNA及其蛋白(B-UGT)表达量呈正相关,但相关系数无统计学意义(r>0,P>0.05)。 结论:肝内胆管结石患者体内UGT1A1基因mRNA及其蛋白(B-UGT)表达丰度均增强,且两者成正相关。其发病可能与基因UGT1A1有关;影响B-UGT活性因素是多方面的,其基因表达量与B-UGT活性不一定成正相关,是否是PIS患者UGT1A1基因编码区发生突变使B-UGT结构异常从而使其功能发生缺陷或丧失仍有待于进一步研究。