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乳腺肿瘤是犬最常见的肿瘤,其中大约一半是恶性肿瘤,所以找到能用于犬乳腺肿瘤诊断和预后的标记蛋白意义重大。近期发现热休克蛋白70羧基端作用蛋白(carboxy terminus of Hsc70interacting protein, CHIP)在人类乳腺癌和胃癌中低表达,认为CHIP是抑癌蛋白。本试验探讨了CHIP在犬乳腺肿瘤的表达及预后情况。另外,化疗药的毒副作用和耐药性是化疗失败的主要原因,而药物的联合应用有希望解决上述问题。目前,5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)是治疗结肠癌的常规化疗药,毒副作用大；而NVP-BEZ235的毒副作用比较小,是P13K/AKT双重抑制剂。因此,我们以结肠癌细胞为研究对象揭示5-FU和NVP-BEZ23抗癌的机制。1.利用免疫组织化学、荧光定量PCR等技术,检测CHIP在犬乳腺肿瘤的表达及基因转录水平。研究发现68%的犬恶性乳腺肿瘤低表达CHIP,而87%的犬良性肿瘤高表达CHIP; CHIP的表达与乳腺肿瘤组织病理学诊断的亚型分类和患犬的预后具有显著相关性(P=0.007和P=0.034)；犬正常乳腺与恶性肿瘤及犬良性乳腺肿瘤与恶性乳腺肿瘤中CHIP的转录水平差异性显著(P=0.001和P=0.009)：CHIP的表达与患犬生存率具有显著相关性(P=0.050)。2.利用CCK8、流式细胞术和Hochest染色技术分析了5-FU, NVP-BEZ235单独或联合用药对结肠癌细胞活性和凋亡的影响。结果显示联合用药与单一药物相比更能显著地抑制结肠癌细胞活性和诱导凋亡。3.通过Western blotting和RNAi技术,研究了5-FU和NVP-BEZ235单独及联合用药作用于HCT-116RHO HCT-116(P53-/-), HCT-116(PUMA-/-)和HCT-116(Bax-/-细胞引起p53/PUMA和PI3K/AKT/PUMA信号通路变化的机制。结果显示5-FU通过p53/PUMA信号通路诱导结肠癌细胞凋亡,并且AKT被激活；NVP-BEZ235通过PI3K/AKT/PUMA信号通路,诱导结肠癌细胞凋亡,并且以非p53依赖性的形式发挥作用；联合用药通过p53/PUMA信号通路和PI3K/AKT/PUMA信号通路诱导结肠癌细胞凋亡。4.利用裸鼠成瘤试验、称量肿瘤重量、测量肿瘤体积和免疫组化等方法证实5-FU和NVP-BEZ235单独及联合用药对肿瘤生长的影响。结果显示单药与联合用药都能显著地抑制肿瘤生长和诱导癌细胞凋亡,并且联合用药抑制效果更好。研究结果表明CHIP的高表达是犬乳腺肿瘤预后良好的潜在参考指标；另外,5-FU和NVP-BEZ235联合用药更能有效地抑制结肠癌细胞的生长、诱导癌细胞的凋亡利抑制肿瘤的生长,并且通过激活p53/PUMA和PI3K/AKT/PUMA信号通路诱导结肠癌细胞凋亡,这可能为癌症的治疗提供了一种新方法。