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背景食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤,占消化系统各部位肿瘤死亡率第二位。食管癌恶性程度高、易早期转移,大多数患者就诊时已经处于中晚期,失去手术机会。由于化疗药物有较大副作用,寻找新的治疗靶点非常必要。研究表明,激活/阻断代谢型谷氨酸受体后可以影响多种肿瘤细胞的生长、迁移。但代谢型谷氨酸受体与食管癌的关系尚不明确,本课题旨在阐明Ⅰ组代谢型谷氨酸受体对食管癌细胞增殖和迁移的作用及其可能的机制。目的本文在食管癌细胞Eca109和KYSE-450中加入Ⅰ组代谢型谷氨酸受体的激动剂DHPG,阐明DHPG对食管癌细胞增殖及迁移的作用,及其介导的下游信号通路。方法首先应用Western blot技术检测食管癌组织及其癌旁组织、正常食管上皮细胞Het-1A与食管鳞癌细胞系中是否有Ⅰ组代谢型谷氨酸受体的表达。应用Ⅰ组代谢型谷氨酸受体激动剂DHPG处理Eca109、KYSE-450细胞后:(1)应用MTT法检测DHPG对食管癌细胞增殖的影响,Transwell实验检测对迁移能力的影响,流式细胞仪检测对细胞周期及凋亡的影响;(2)Western blot检测p21、Bcl2、Bax、E-cadherin、β-catenin、vimentin、AKT、p-AKT、m TOR、p-m TOR、p-p70S6K、p-4EBP1等相关蛋白的变化。结果1.Western blot结果显示,食管癌组织及其癌旁组织中、正常食管粘膜上皮细胞Het-1A与所检测的食管鳞癌细胞系中均表达Ⅰ组代谢型谷氨酸受体的两个亚型,即m Glu R1和m Glu R5。该结果为我们后续的实验提供了理论基础。2.MTT检测DHPG对食管鳞癌细胞Eca109和KYSE-450增殖的影响。发现DHPG能够抑制Eca109和KYSE-450细胞的增殖(p<0.05),并且随着浓度的提高和作用时间的延长抑制作用明显增强。通过对不同浓度不同时间点的抑制率比较,我们选取Eca109细胞进行后续实验。3.Transwell迁移实验结果显示,正常对照组Eca109迁移的细胞数为457.82±47.25个/视野,DHPG处理实验组迁移的细胞数为258.76±38.53个/视野。与对照组比,DHPG显著抑制Eca109细胞的迁移(p<0.01)。4.流式细胞术实验结果显示,对照组细胞处于S期的比值为(26.52±4.35)%,而实验组S期比值为(45.44±6.73)%,说明DHPG阻滞Eca109细胞增殖在S期(p<0.01)。对细胞凋亡分析表明,DHPG能够促进食管癌细胞的凋亡。5.Western blot检测发现,与对照组比,DHPG处理细胞48 h后明显降低p-AKT、p-m TOR、p-p70S6K、p-4EBP1水平和上调细胞周期相关的蛋白p21,但是下调与凋亡相关的蛋白Bcl2/Bax的比值。另外,DHPG上调和迁移相关的蛋白E-cadherin而下调β-catenin和vimentin表达水平。结论1.I组代谢型谷氨酸受体在食管癌组织及食管癌细胞系中均有表达;2.DHPG抑制食管癌细胞的增殖,可能由其促进细胞周期阻滞在S期和促进细胞凋亡所介导;3.DHPG抑制食管癌细胞迁移,可能由其抑制上皮间质转化介导;4.激活Ⅰ组代谢型谷氨酸受体后对细胞的抑制作用与抑制AKT/m TOR/p70S6K-4EBP1信号通路相关。