【摘 要】
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从柑橘健康植株的枝条木质部中分离得到对油菜核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)有拮抗作用的细菌菌株YS45。通过形态学和生理生化鉴定,结合16S rRNA基因序列分析的方法,确定Y
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从柑橘健康植株的枝条木质部中分离得到对油菜核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)有拮抗作用的细菌菌株YS45。通过形态学和生理生化鉴定,结合16S rRNA基因序列分析的方法,确定YS45为一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。YS45的发酵液(离心除去菌体)对油菜核盘菌有明显的抑菌作用。发酵液的抑菌活性具有较好的热稳定性,在pH 6.0~8.0之间最佳,在pH<6.0的条件下较稳定,而在pH>8.0的条件下不稳定。木瓜蛋白酶处理导致发酵液的抑菌活性降低。此外,YS45发酵液的抑菌活性随培养时间变化,形成一条与生长曲线类似的曲线。利用有机溶剂萃取的方法分离纯化发酵液中的抗菌物质,未能获得具有抑菌活性的物质,推测YS45菌株产生的抗菌物质属水溶性物质,具有较强的极性。利用酸沉淀的方法沉淀抗菌物质,试验表明pH 3.0的条件下沉淀物的保留活性为95%。酸沉淀物经甲醇抽提后,得到了抗菌物质的粗提物。粗提物经DEAE-Sepharose CL-6B和Sephadex G25分离纯化后,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对活性组分进行分离纯化,由此收集的组分用于质谱测定。质谱分析结果表明抗菌物质为一组fengycin同系物,包括fengycins A,fengycins B和最近发现的一种比较少见的fengycin类型。为了评估YS45菌株对油菜菌核病的生物防治效果,其发酵液被用于油菜离体叶片试验、盆栽苗试验和田间试验,结果表明;在油菜离体叶片试验和盆栽苗试验中,YS45发酵液的防效在70%以上;在田间试验中,其防效在50%以上(作为保护剂使用时,其防效在60%以上)。由此可见,YS45菌株确是一株具有重要开发价值的生防菌。
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