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霍山石斛(Dendrobium huoshanense C.Z.Tang& S.J.Cheng)是一种传统名贵的中药材,富含石斛多糖和生物碱等多种生物活性成分。由于霍山石斛自然繁殖率低,加上长年无节制采挖,自然资源已日趋枯竭,本研究对霍山石斛的组织培养、试管苗移栽以及其主要药用成分的变化规律等进行了研究,旨在其人工产业化栽培提供技术支撑。主要研究结果如下:
1.试管内和栽培大棚的霍山石斛开花植株均可以成功授粉,栽培大棚中的授粉成功率要高于试管内的成功率,并且这两种条件下的异花授粉座果率均高于自花授粉的座果率。栽培棚中植株开花后2d左右授粉时可以获得最高的座果率(65.15%)。
2.香蕉、土豆、苹果等有机添加物对霍山石斛试管苗壮苗均有促进作用,其中香蕉壮苗的效果最好,通过植株高度、鲜重、增殖新株数等指标的测定筛选得到了最佳的壮苗培养基(花宝H+100 g/L香蕉)。
3.在BA、TDZ和IBA三种生长调节剂中,BA对试管开花的影响最大,诱导试管开花效果最好,在培养基MS+2.0 mg/L BA+50 g/L香蕉上试管开花率可达10%。
4.利用筛选出的Hy培养基(1.0 g/L花宝1号+1.0 g/L花宝2号+1.0 g/L蛋白胨+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L VB5+铁盐(27.8 mg/L FeSO47H2O+37.3 mg/LNa2EDTA)+15 g/L蔗糖+50g/L香蕉+1.0 g/L活性炭),可以完成从种子萌发、原球茎诱导与分化、到试管苗生根和成苗的整个培养过程。
5.以不同器官为外植体进行再生体系的建立研究,结果以叶片和根为外植体时没能诱导出再生植株,以带节茎段为外植体时较易诱导出再生植株;接种于Hy培养基上的带节茎段的新芽诱导率可以达到71.7%,在接种4个月后即可长成具有6片叶、株高约4 cm且根长达1.8 cm左右的新植株。
6.筛选得到试管苗移栽的最佳基质为下部3/10树皮+上部7/10混合木屑,该栽培基质既具有较高的透气性和持水度,还具有较低的电导度,不但可以保证霍山石斛种苗移栽的成活率(78%),而且还可保证其有较高的萌芽率(2.73个/株)。
7.对多糖含量变化规律进行了研究,发现在试管苗阶段,具3个节的试管苗的多糖含量可以达到13.35%;对不同年份的霍山石斛主要成份进行了研究,结果显示两年生霍山石斛茎中的多糖含量最高(22.1%);三年生茎中生物碱含量最高(0.0172%);而游离氨基酸在一年生茎中含量最丰富(8.22 mg/g);对微量元素的比较发现,组培苗的微量元素含量普遍高于多年生植株。