【摘 要】
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甜瓜是一种具有经济价值的园艺作物,由于其醇香甘甜且营养丰富而深受消费者喜爱,在世界各地广泛栽培。本研究以甜瓜品种河套蜜瓜(Cucumis melo L.cv Hetao)为材料,通过对本实验室已获得的甜瓜果实转录组数据分析,选择果实发育不同时期差异表达基因CmIAA16和CmGSTU12,对其进行了生物信息学分析、克隆、表达谱及遗传转化研究,主要结果如下:(1)通过双向比对法,分别在甜瓜中鉴定得到
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甜瓜是一种具有经济价值的园艺作物,由于其醇香甘甜且营养丰富而深受消费者喜爱,在世界各地广泛栽培。本研究以甜瓜品种河套蜜瓜(Cucumis melo L.cv Hetao)为材料,通过对本实验室已获得的甜瓜果实转录组数据分析,选择果实发育不同时期差异表达基因CmIAA16和CmGSTU12,对其进行了生物信息学分析、克隆、表达谱及遗传转化研究,主要结果如下:(1)通过双向比对法,分别在甜瓜中鉴定得到18个Aux/IAA基因和48个GST基因,分析两个家族基因编码蛋白的分子量、等电点、氨基酸个数等理化性质,得到了该家族成员的染色体定位、基因密度、亚细胞定位、基因结构、保守基序及蛋白系统进化关系的分析预测结果,结果表明CmIAA16基因可能通过参与激素信号通路从而调控激素信号通路下游基因的表达,进而在植物的生长发育过程中发挥作用;而CmGSTU12可能通过参与激素诱导及响应非生物胁迫来发挥作用。(2)采用RT-PCR对目的基因进行了cDNA克隆,得到的ORF长度分别为714 bp和657 bp,构建了其各自的超表达载体和基因编辑载体,命名为:pPIAA16、pPGSTU12、pYL-IAA16和pYL-GSTU12。(3)利用实时荧光定量PCR分析CmIAA16和CmGSTU12基因在果实不同发育时期的表达量,结果显示CmIAA16在生长期果实中表达量最高,CmGSTU12基因在呼吸跃变期果实中表达量最高,与转录组数据相符。(4)采用子房注射法对甜瓜进行遗传转化,获得T1代转化种子,随机选取60粒饱满种子并对其进行PCR检测。从阳性率高的导入果实中随机选取120粒种子播种于温室,观察果实表型后发现,转化CmIAA16超表达载体的T1代果实较对照组提前成熟了4.3天,初步表明CmIAA16基因具有促进果实成熟的功能,可能是甜瓜果实成熟过程的正调控因子;转化CmGSTU12超表达载体的T1代果实较对照组延迟成熟了5.5天,初步表明CmGSTU12基因具有抑制果实成熟的功能,可能是甜瓜果实成熟过程的负调控因子。
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