人参皂苷Rg3对3T3-L1脂肪细胞增殖和分化的影响及其机制研究

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目的:探究人参皂苷Rg3对3T3-L 1脂肪细胞增殖与分化作用,进一步探究其相关机制。方法:体外实验:1.MTT法检测人参皂苷Rg3对3T3-L 1脂肪细胞增殖的影响;2.荧光素酶法检测人参皂苷Rg3对3T3-L1脂肪细胞内ATP含量的影响;3.ROS活性氧簇检测;4.RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)与Western blot检测标志基因与蛋白表达检测。体内实验:1.取25只ICR小鼠分为正常饮食组与高脂饮食组,高脂饮食组分为阳性对照组与干预组,干预组给予不同浓度的Rg3溶液灌胃治疗20天。2.测各组小鼠体重、附睾脂肪与肝脏脂肪重量。结果:体外细胞实验结果:1.阳性对照组和空白组比较,细胞存活率明显下降,有极显著差异性(P<0.001),提示造模成功。给予不同的质量浓度的人参皂苷Rg3溶液干预后,Rg3-0.01干预,Rg3-0.1干预组细胞活力均明显上升,均具有极显著差异性(P<0.001)。2.Rg3-0.01干预组,Rg3-0.1干预组分别与阳性对照组比较,3T3-L1脂肪细胞中的ATP含量上升,均具有统计学差异性(P<0.05)。3.Rg3-0.01干预组ROS含量虽然有所降低,但与阳性对照组比较无统计学意义;Rg3-0.1干预组细胞内ROS水平与阳性对照组比较显著降低,具有统计学差异性(P<0.05)。4.RT-PCR灰度分析结果:①PPAR-γ mRNA表达:经不同浓度人参皂苷Rg3干预后,与阳性对照组比较Rg3-0.01干预组mRNA表达受到抑制,具有统计学差异性(P<0.05)。Rg3-0.1干预组与阳性对照组比较PPAR-γ mRNA表达具有统计学差异性(P<0.0])。②C/EBPα mRNA:经不同浓度人参皂苷Rg3干预后,Rg3-0.1干预组mRNA与阳性对照组比较表达受到抑制,具有统计学意义(P<0.05)。(③SREBP1 mRNA:经不同浓度Rg3干预后,Rg3-0.01干预组、Rg3-0.1干预组分别与阳性对照组比较,mRNA表达受到抑制,均有统计学差异性(P<0.05;P<0.01)。④FAS mRNA: Rg3-0.1干预组与阳性对照组比较,FAS mRNA表达受到抑制,具有统计学差异性(P<0.05)。5.Weston bolt结果:3T3-L1脂肪细胞转录因子蛋白表达受到抑制,其中Rg3-0.01干预组PPAR-γ的蛋白表达与阳性对照组相比差异具有统计学差异性(P<0.01)。Rg3-0.1干预组转录因子PPAR-γ蛋白表达显著低于阳性对照组,有显著统计学差异性(P<0.001)。Rg3-0.1干预组C/EBPα的蛋白表达非常明显低于阳性对照组,(P<0.001)。体内实验结果:1.高脂饮食小鼠给予不同浓度的Rg3经灌胃治疗后体重明显下降,与阳性对照组比较,均具有统计学意义(P<0.001)。2.Rg3-1干预组、Rg3-3干预组分别与阳性对照组比较,肝脏脂肪重量明显降低,具有统计学极高差异性(P<0.001)。Rg3-]干预组和Rg3-3干预组附睾脂肪重量分别与阳性对照组比较重量减轻,均具有统计学差异性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可以提高3T3-L1的细胞活力,促进其增殖,抑制细胞分化过程,成脂过程中重要转录因子mRNA与相关蛋白的表达受到抑制;可降低高脂饮食小鼠体重与体内脂肪重量。说明人参皂昔具有轻身减肥,维持机体脂质代谢平衡的作用。
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