【背景与目的】免疫治疗中针对程序性细胞死亡受体（PD-1）的阻断,可有效治疗数个癌种。多项研究表明,外周血中一些免疫治疗相关的细胞因子、T细胞亚群,与组织的特有基因突变分布一致,外周血动态监测免疫治疗生物标记物是有可能的。在本研究中,我们通过动态检测肿瘤患者外周血指标,初步探索与抗PD-1免疫疗效相关的外周血生物标志物。【研究方法】入组2018年11月至2019年10月在福建协和医院接受免疫治疗晚期肿瘤患者46例,每次免疫治疗前抽取空腹静脉血。20例健康志愿者作为对照组。1.通过Elisa检测分析血浆中细胞因子IL-6、IL-8、IL-10、INF-γ的变化趋势,通过AU5800全自动酶标分析检测外周血LDH水平,并分析与免疫治疗近期疗效的关系。2.采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞免疫检查点的表达情况,分析外周血免疫细胞亚群的分布情况,Ki-67作为T细胞活化指标。收集患者临床资料,初步总结外周血生物指标与近期疗效的关系。3.循环肿瘤DNA突变负荷（ctDNA TMB）检测,并与外周血免疫指标疗效预测进行一致性分析。【结果】1.肿瘤患者免疫治疗前即存在全身炎症表现。抗PD-1免疫治疗无应答组患者IL-6、CXCL-8治疗后血清浓度较治疗前明显升高,可能提示预后不佳;应答组患者INF-γ较前升高,且幅度比无应答组大,提示预后较好,但该结果尚需扩大样本进一步证实。2.LDH可能是肿瘤负荷的潜在循环指标。3.Ki-67+CD8+T细胞在抗PD-1治疗1周期后增加,之后在大多数患者中出现下降;治疗过程中Ki-67表达的增加在PD-1+和PD-1-CD8+T细胞中最为显著（P<0.0001）。多数肿瘤患者（46例中的30例）在治疗后的PD-1+CD8+T细胞中Ki-67表达有生物学意义的增加。4.应答的Ki-67+CD8+T细胞群主要是CD45RAlo、CD27hi,含有高表达CTLA-4、PD-1、2B4,低表达NKG2-D的细胞（P<0.0001）,提示抗PD-1免疫治疗可能对这类细胞的活化产生影响。Ki-67在表达抑制性受体的CD8+T细胞中的表达趋势提示大约45%的PD-1+CTLA-4+CD8+T细胞在治疗前表达Ki-67,并且在治疗后增加到69%左右。5.更高的肿瘤负荷与治疗前更多的Ki-67+CD8+T细胞相关,且这种相关性在治疗后变得更强。PD-1+CD8+T细胞（Tex细胞）Ki-67在治疗周期中表达率的最大倍数变化比较,应答组高于无应答组（P<0.0001）。6.PFS较长的患者通常肿瘤负荷较低,抗PD-1免疫治疗1周期时PD-1+CD8+T细胞Ki-67表达率与肿瘤负荷比大于0.6与PFS的改善相关（P<0.05）。7.抗PD-1治疗1周期后,血浆中的IFNγ增加,与PD-1+CTLA-4+CD8+T细胞亚群的增加具有一致性（P<0.0001）。8.治疗1周期时Ki67/LDH（%）（调整后）大于1.5,PD-1+CD127+CD4+T细胞Ki-67表达率与肿瘤负荷比大于0.5,CD8+CD45RO+/CD8+（%）大于40.2%可能与PFS的改善相关（P<0.05）。9.免疫指标Ki-67+/PD-1+CTLA-4+CD8+（%）、Ki-67+/TB（%）（PD-1+CD8+T Cell）对肿瘤患者抗PD-1免疫治疗疗效的预测与TMB有较好的一致性,Cohen’s kappa系数分别为0.783和0.800（P<0.05）。【结论】1.肿瘤患者免疫治疗前即存在全身炎症表现,一定程度的T细胞活化可影响细胞因子INF-γ、IL-6、CXCL-8、IL-10等的趋势变化。细胞因子INF-γ的升高可能提示PD-1免疫治疗疗效较好;细胞因子CXCL-8、IL-10的升高可能提示免疫治疗疗效较差。但尚需进一步证实。2.LDH可能是肿瘤负荷的潜在循环指标。3.与肿瘤负荷相关的治疗前后循环Tex细胞活化与临床疗效相关;循环Tex细胞亚群是抗PD-1免疫疗效的临床可获得的潜在疗效预测因子。4.PFS较长的患者通常肿瘤负荷较低,且1周期时Tex细胞活化与肿瘤负荷的比值可能与临床预后有关。5.Ki67/LDH（%）（调整后）、CD8+CD45RO+/CD8+（%）、PD-1+CD127+CD4+T细胞Ki-67表达率与肿瘤负荷比可能对PD-1免疫治疗的疗效有一定的预测作用。6.免疫指标Ki-67+/PD-1+CTLA-4+CD8+（%）、Ki-67+/TB（%）（PD-1+CD8+T Cell）与b TMB对肿瘤患者抗PD-1免疫疗效的预测有较好的一致性。