疟疾是一种全球性的寄生虫传染病,青蒿素类药物被认为是目前最好的抗疟药物,尤其是对脑型疟疾和抗氯喹恶性疟疾疗效好。目前青蒿素的唯一来源仍是从野生黄花蒿中浸提。由于黄花蒿中青蒿素含量普遍较低,运用现代生物技术提高其青蒿素含量是值得努力的方向。青蒿素合成的部位被认为是在黄花蒿的腺毛细胞中,腺毛的密度及其细胞代谢水平将直接影响青蒿素的含量。我们利用来源于拟南芥表皮毛特异表达基因G12的启动子和来源于棉花纤维细胞高效表达的E6基因启动子,与色氨酸单加氧酶基因iaaM构建重组基因,分别开展了黄花蒿的遗传转化。首先采用PCR扩增法从拟南芥中克隆了其G12基因的启动子序列,将G12启动子和iaaM基因重组到Ti质粒载体pWM101上,构建成植物表达载体pWM101-G12::iaaM。此前实验室还构建了pWM101-E6::iaaM。将这两种重组质粒都转化到根癌农杆菌GV3101中。对黄花蒿的组培再生体系和遗传转化体系进行了摸索优化,确定了可以使黄花蒿具有高分化率、生根率的激素配比,对子叶、幼嫩叶盘、胚轴等不同的外植体的对比培养,表明子叶为较合适的外植体,其出芽率高达86%,分化周期短,25天左右即可出芽。在此基础上对子叶外植体的潮霉素耐受性进行了系统的分析,确定以8mg/L的潮霉素为筛选条件。建立了黄花蒿培养和遗传转化体系。采用根癌农杆菌共培法,将Gl2::iaaM、E6::iaaM转化黄花蒿子叶或幼嫩的叶盘中。经8mg／L潮霉素的筛选和PCR分子检测,成功获得E6::iaaM转基因黄花蒿。筛选出5株阳性转基因植株,4株分化苗长至4cm左右时均黄化坏死,仅1株成活。通过腺毛密度的观察,转基因黄花蒿叶片上的腺毛密度数量增加约21%左右,Gl2::iaaM转化尚仅得到潮霉素抗性的芽点。由于获得的转基因植株数量有限,不能满足田间实验和统计分析要求,未能与非转基因进行田间对照种植和直接检测其青蒿素含量,有待于多获得一些转基因植株再进行统计分析。