论文部分内容阅读
疫苗免疫是防控禽流感暴发流行、保障养禽业及人类健康的重要措施之一。当前所用禽流感油乳剂灭活疫苗对蛋鸡和蛋鸭免疫效果非常好，但免疫肉鸭抗体稍偏低，而且肉鸭生长周期短，白油佐剂疫苗吸收较慢，在一定程度上影响了养鸭者的免疫积极性。因此有必要系统研究鸭免疫后体液和细胞免疫反应，比较不同佐剂禽流感灭活疫苗的免疫效果，筛选适合鸭，特别是肉鸭免疫的禽流感灭活疫苗佐剂，为水禽禽流感的疫苗免疫防控提供参考和借鉴。通过用HI试验监测肉鸭母源抗体消长规律以及不同日龄雏鸭的抗强毒攻击保护性研究，表明肉鸭也需要进行免疫才能防止发生禽流感。结合不同日龄免疫抗体变化和生产实践，确定肉鸭首免日龄为9到15日龄较为合适。为研究重组金黄色葡萄球菌肠毒素A（rSEA）对禽流感疫苗的免疫增强效果，制备了不同rSEA含量的禽流感油乳剂灭活疫苗。试验结果表明，白油佐剂疫苗中rSEA含量为16.7μg/0.5ml时，能明显缩短保护性抗体产生时间，提高抗体滴度。试验确定了体外表达的未纯化rSEA（rrSEA）不能增强SPF鸭对禽流感油乳剂灭活疫苗体液免疫应答反应；通过对灭活禽流感病毒液中加入不同含量的左旋咪唑的免疫抗体检测，确定含0.2mg/0.5ml的左旋咪唑能增强疫苗的免疫效果。为研究不同佐剂禽流感灭活疫苗对SPF鸭的免疫效果，制备了4种不同油乳剂灭活疫苗，以及蜂胶、rSEA、左旋咪唑佐剂和不含佐剂的灭活病毒液4种水剂疫苗。油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸭后，白油+rSEA疫苗免疫7天HI抗体可达5.9log2，显著高于其他各组，Montanide ISA71VG疫免疫后11至28天HI抗体均高于单纯白油佐剂疫苗，而Montanide ISA206VG佐剂苗免疫后HI抗体产生时间及滴度均低于其他3组油苗。水剂疫苗免疫抗体总体上低于油苗免疫，左旋咪唑免疫11天后HI抗体开始高于其他各组，免后14天达到4.9log2，并且抗体持续时间较长。本研究采用鸭IFN-γ、IL-2、GAPDH基因特异性引物，提取脾脏组织Total RNA，建立SYBRGreen I荧光定量RT-PCR方法。结果表明，建立的荧光定量RT-PCR特异性、重复性和稳定性良好，能快速、准确检测鸭体内细胞因子的表达水平，为进一步评价疫苗免疫效果奠定了基础。为筛选适合肉鸭免疫的禽流感灭活疫苗佐剂，比较了不同佐剂灭活疫苗免疫肉鸭后抗体产生滴度、外周血淋巴细胞增殖活性、脾脏IFN-γ和IL-2mRNA相对表达量、疫苗在组织中的残留情况和攻毒保护效果。结果表明，油佐剂疫苗免疫肉鸭均能提供抗强毒攻击的完全保护；白油+rSEA、Montanide ISA71VG佐剂疫苗能提高肉鸭免疫的HI抗体并能产生良好的细胞免疫应答反应，并且71VG佐剂疫苗在体内代谢的速度最快。水剂疫苗免疫后，疫苗吸收快且局部损伤小；左旋咪唑佐剂疫苗免疫肉鸭后产生的抗体高且持续时间长，而且能为免疫鸭提供抗强毒攻击的完全保护；蜂胶和SEA虽然能增强机体细胞免疫应答，但其疫苗均只能提供8/10的抗死亡保护。综上所述，现用白油佐剂疫苗中加入适量提纯的rSEA，能显著增强机体的细胞免疫水平并诱导免疫鸭产生早而高的HI抗体。Montanide ISA71VG佐剂疫苗比现用白油佐剂疫苗能诱导更好的细胞免疫反应，不仅免疫抗体高于后者，而且更容易吸收。灭活的禽流感病毒液加入适量左旋咪唑，可使免疫鸭产生良好的免疫抗体，并可使免疫鸭攻毒后获得完全的抗死亡保护。