家蝇PGRP-SC和CathepsinL基因的免疫相关功能分析

来源 :河北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:edison_young
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本论文以家蝇为研究对象,研究内容主要分为2个部分:  第1部分:PGRPs作为模式识别受体,在抵抗外界微生物入侵中起到了重要的作用。但是某些PGRPs在动物体内的功能还比较模糊。本研究中,通过转录组数据从家蝇体内克隆得到基因MdPGRP-SC。并借助RNAi、real-time PCR等技术分析了MdPGRP-SC基因在家蝇先天免疫中的作用。结果显示,MdPGRP-SC基因作为组成性表达的因子负调控Imd通路。该基因的下调加强Imd通路对于免疫刺激的敏感性。此外,研究过程中发现下调MdPGRP-SC基因后,家蝇化蛹速度较野生型家蝇迟缓。所以,MdPGRP-SC基因可能在家蝇的先天免疫和发育中都起到了重要作用。这有助于今后研究免疫和发育的协同调节。  第2部分:组织蛋白酶L(Cathepsin L)是类木瓜蛋白酶半胱氨酸蛋白酶家族的一员。组织蛋白酶L在溶酶体内蛋白质末端降解中起作用,参与多种生理和病理过程。本研究通过RT-PCR技术在家蝇中克隆得到组织蛋白酶L(命名为MdCathepsin L),其cDNA全长1352 bp,开放阅读框1122 bp,编码373个氨基酸残基。Real-time PCR检测该基因在各组织中均有表达,其中血细胞中的表达水平最高。借助real-time PCR、northern blot、western blot等技术分析MdCathepsin L在免疫刺激后的表达模式。结果显示用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌刺激后,MdCathepsin L的表达量显著上调,这表明组织蛋白酶L的确与家蝇免疫相关。为了进一步研究组织蛋白酶L的功能,用昆虫细胞表达系统对MdCathepsin L成熟肽进行了重组表达。这些工作为组织蛋白酶L的深入研究奠定基础。
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