中国野生菰米对胰岛素抵抗的作用及其3种淀粉和植物化学物的分析测定

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目的:(1)观察中国菰米提取物对棕榈酸诱导的HL-7702细胞急慢性损伤的保护作用,观察中国菰米提取物对胰岛素抵抗HepG2细胞模型的作用;   (2)观察中国菰米对高脂饮食诱导的大鼠胰岛素抵抗的作用,并观察大鼠的血糖、血脂、胰岛素、抵抗素等指标的变化,以探讨中国菰米改善胰岛素抵抗的作用机制;   (3)测定中国菰米的总淀粉、直链淀粉和抗性淀粉的含量,测定其总黄酮、皂甙和花色苷的含量,以探索中国菰米生理功能的物质基础。   方法:(1)用棕榈酸诱导HL-7702细胞发生急慢性损伤,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,然后加入适当浓度的菰米提取物,观察其对细胞急慢性损伤的保护作用;用棕榈酸诱导HepG2细胞发生胰岛素抵抗,用葡萄糖检测试剂盒检测细胞对葡萄糖的消耗量,然后加入适当浓度的菰米提取物,观察HepG2细胞的葡萄糖消耗量的变化。   (2)40只SD雄性大鼠随机分成高脂模型对照组、米面组、菰米组和阴性对照组,分别给予高脂饲料、米面饲料、菰米饲料和基础饲料,喂养6周。每周观察大鼠基本情况并称重,每2周尾静脉采血测定大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(Ins)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),第6周末实验结束时,股动脉取血测定血清抵抗素(Res)浓度,颈椎脱臼处死大鼠,分离肾脏、肠系膜和睾丸周围脂肪,称重,计算脂体比。计算大鼠的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并与其他指标进行相关性分析。   (3)采用国标法测定中国菰米总淀粉和直链淀粉含量,改良Goni法测定抗性淀粉含量;比色法等测定中国菰米总黄酮、皂甙和花色苷的含量。   结果:(1)0.25mM、0.50mM、1.0mM浓度的棕榈酸能引起HL-7702细胞生长抑制(急性损伤),100μ g/ml的菰米提取物能够减轻该急性损伤作用;0.05mM的棕榈酸能引起HL-7702细胞发生凋亡(慢性损伤),50μ g/ml的菰米提取物能够减轻该慢性损伤作用。0.075mM的棕榈酸诱导HepG2细胞发生胰岛素抵抗,对葡萄糖的摄取利用能力下降,100μ g/ml的菰米提取物能够使细胞对葡萄糖的摄取利用能力提高,改善其胰岛素抵抗的程度。   (2)动物实验结果表明,经过6周的饲养,与高脂模型对照组和米面组大鼠相比,菰米组大鼠的体重、空腹血糖、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数、总胆固醇、甘油三酯、抵抗素水平、内脏脂肪量和脂体比明显下降,高密度脂蛋白胆固醇水平明显升高。抵抗素与体重、总胆固醇、胰岛素、胰岛素抵抗指数以及内脏脂肪量成正相关,与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关;HOMA-IR与体重、甘油三酯、抵抗素、内脏脂肪量及脂体比成正相关,与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关。   (3)中国菰米的总淀粉含量为65.47g/100g,直链淀粉的含量为8.37%,抗性淀粉含量为11.73g/100g;中国菰米的总黄酮含量为0.352%,高于黄豆和玉米;其皂甙含量为0.254%,低于黄豆,但是高于玉米;花色苷含量为2.4g/100g。   结论:(1)不同浓度的棕榈酸可以诱导HL-7702细胞急慢性毒性模型,而菰米提取物对棕榈酸诱导的HL-7702细胞急慢性毒性有一定的保护作用;适当浓度的菰米提取物对棕榈酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗有保护作用,但是当菰米提取物浓度过低时则未观察到该保护作用,并且菰米提取物发挥细胞胰岛素抵抗的保护作用可能不依赖于胰岛素的存在。   (2)菰米能改善高脂饮食诱导的大鼠胰岛素抵抗,可能是通过抑制大鼠的肥胖程度和体内脂肪堆积、改善糖脂代谢、降低抵抗素水平等一系列综合作用,从而使胰岛素抵抗得到改善。   (3)菰米的抗性淀粉含量略高,并且含有丰富的黄酮、皂甙和花色苷,这可能是菰米发挥生理功能的物质基础。
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