核糖体失活蛋白(RIP)是一类广泛存在于植物界中的毒蛋白。由于其对人类和动物细胞具有独特的生物活性和对治疗艾滋病、癌症等具有潜在的应用价值，从而引起了人们极大的兴趣。目前报道的RIP大多来自高等植物，在食用菌中也有一些发现。本文针对黑木耳中的RIP进行了研究。 本项目研究是先从黑木耳菌丝体中分离得到RIP，测得其分子量为26KDa，再根据其氨基酸序列对RIP的基因进行克隆。首先，对纯化得到的RIP进行随机肽段的氨基酸序列测序。根据测序结果，结合黑木耳密码子的偏爱性及引物设计原则，设计简并引物。使用cDNA 3一末端全长序列扩增试剂盒，进行3-RACE反应。经过电泳、片段回收、连接、转化、蓝白筛选、质粒提取、PCR鉴定等操作，进行RIP cDNA 3-端序列测定。根据测序结果，对序列进行分析，并设计特异性PCR巢式引物。使用cDNA 5-末端全长序列扩增试剂盒，进行5-RACE反应。再经过电泳、片段回收、连接、转化、蓝白筛选、质粒提取、PCR鉴定等操作，进行RIP cDNA 5-端序列测定。最后，拼接3-端和5-端基因序列，得到完整的黑木耳RIP cDNA序列。整个cDNA全长序列为760bp，编码234个氨基酸序列，与其它RIP的同源性较小。 本项目研究不但运用了一种克隆基因的有效方法，而且为下一步核糖体失活蛋白基因的外表达等研究工作做了良好的前期工作。