花对称性基因SQU在露地菊‘火焰’中的遗传转化

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露地菊‘火焰’(Chrysanthemum morifolium’Huoyan’)是常用的园林绿化观赏花卉。其特点为:繁殖快,花型众多、颜色丰富、抗逆性强、观赏价值高等。本研究选取从百脉根(Lotus japonicas)中得到的SQU基因作为遗传转化基因,以潮霉素为筛选介质,采用农杆菌介导的方法转入露地菊‘火焰’,探寻高效稳定的遗传转化体系,培育拥有独特花瓣性状的新品种,研究SQU基因对于露地菊‘火焰’表型的影响,从而了解其进化、亲缘关系,扩充CYC类基因资源。主要研究结果如下:1露地菊‘火焰’遗传转化体系的建立通过对遗传转化中各影响因子的具体分析建立了高效的遗传转化体系。该体系为:利用30d苗龄的露地菊‘火焰’叶片外植体为材料,经预培养2d,用OD600值为0.4的农杆菌侵染10min,在25℃黑暗条件下共培养2d,进行4d延迟培养,以300mg/L的Cef为抑菌浓度,采用选择压递增的方式,初筛选采用8mg/L潮霉素,待出芽后切下转入采用10mg/L潮霉素的复筛培养基,将筛选后得到芽转入生根培养基至产生生根茁壮的转化植株。2转基因植株的获得将转化植株利用潮霉素引物进行PCR检测获得三个阳性植株,再利用基因特异性引物进行PCR检测获得与上步同样的三个阳性植株,确认此三株为成功的转基因植株。转化率为1.5‰。3转基因植株的表型观察利用非转基因植株实验得知,将植株栽培在含有土:蛭石=1:1的花盆并于人工气候箱培养15d后再于室内培养15d是非常高效的炼苗方式。将转基因植株炼苗后移栽入土地中,开花后对其表型观察发现:非转基因植株花较转基因植株花更为茂盛;非转基因植株花序全部为辐射对称,而转基因植株花序有辐射对称也有的不是辐射对称,呈现不完全的辐射对称性;非转基因植株舌状花瓣的畸形率为5%,转基因植株舌状花瓣的畸形率为3.3%。
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