本文以简单的改良CaCl2法制备感受态细胞为研究基础，对转化效率的影响因素进行研究。在此基础上，制备了高效感受态细胞并建立了转化体系，以鸟枪法克隆到了枯草芽孢杆菌的α-淀粉酶基因。 1．以改良CaCl2法为基础，研究了影响转化效率的众多因素，首先研究了感受态细胞制备过程中对转化效率的影响因素，其中培养基、培养基pH值、细胞浓度、镁离子是转化效率的重要影响因素，在这些研究结果的基础上，顺利的制备了转化效率为10~9转化子/μgks质粒的高效感受态细胞。其次，研究了转化过程中对转化效率的影响因素。质粒浓度在1pg/μl-1ng/μl的范围内转化效率基本保持一致，在大于1ng/μl时，转化效率开始下降，在10ng/μl时，转化子数最多，说明10ng/μl是质粒转化时的饱和浓度。质粒大于7.3kb时，质粒大小成为转化效率的限制因素。热激温度、热激时间、通风条件、转化介质、冰浴时间等因素对转化效率的影响并不重要。但要保证高转化效率，热激过程并不能忽视，因为热激转化、快速转化、37℃水浴转化三种转化方式结果差异显著。 2．将在实验中涉及到的三种感受态细胞制备方法（Inoue法，改良CaCl2，单菌落法），三种转化方式（热激转化，快速转化，37℃水浴转化）和不同目的的转化实验具体的结合起来，建立了如下体系： 该体系简明、具体，具有概括性并在克隆枯草芽抱杆菌a－淀粉酶 基因时得到应用。 3．用鸟枪法克隆到了枯草芽抱杆菌a－淀粉酶基因。经过实验，采 用0．3U Sau3AI酶对抽提的枯草芽袍杆菌总DNA酶切30分钟，回 收集中在3刁kb之问的片段，与经BamHI酶切、去磷后的ks质粒，载体混 合，加入 T4DNA igase、ligase buffer、去离子水使反 应体积为20 DI在14刁6C后条件下反应16刁8小时，扩大反应‘体系为50v1，在继续反应16叫8小时，用高效感受态细胞进行 转化得到 20m0个转化子。由于采用 LBSP a－淀粉酶鉴定平板初 步挑选到了克隆子，经过质粒快检，质粒转化，最终克隆到了。－ 淀粉酶基因。