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目的基于Numb蛋白是一种重要的细胞分化因子,影响细胞周期G1/S转换,且运用小RNA(Small activator RNA,sa RNA)激活numb蛋白表达能将前列腺癌细胞阻滞在G1周期。本实验进一步为Numb基因筛选出具有激活功能并相对高效的sa RNA分子,测定Numb基因m RNA及蛋白表达水平,继而验证SHh、GLi和Cyclin E的m RNA和蛋白的表达水平,进一步探讨sa RNA激活AIPC细胞Numb基因对Hedgehog信号通路重要因子SHh、GLi和Cyclin E的表达的影响。方法1.设计与合成针对Numb基因的小分子双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)分子。2.将ds RNA分子转染人前列腺癌PC-3细胞从而获得numb稳定高表达的重组人前列腺癌细胞(重组PC-3细胞)作为实验组细胞,空载入病毒的PC-3细胞作为阴性对照组,未转染的人前列腺癌细胞作为空白对照组。3.采用Real-time quantitative PCR(Rt-q PCR)法检测三组细胞中靶基因Numb、SHh、GLi及Cyclin E的m RNA表达水平。4.Western Blot分别验证三组细胞中靶基因Numb、SHh、GLi及Cyclin E的蛋白表达水平。5.流式细胞技术检测三组细胞的细胞周期分布情况。6.对比三组细胞生长情况、Western bloting和PCR检测结果,探讨上调Numb后对Hedgehog信号通路启动子SHh、信号通路调控因子GLi和细胞周期转录因子Cyclin E的表达的影响情况。结果1.筛选出具有激活功能的特异sa RNA激活了前列腺癌AIPC细胞内Numb基因高表达;2.利用流式细胞技术检测细胞周期分布情况,经上调numb基因的实验组细胞G1期细胞分别较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);3.转染组前列腺癌细胞Numb基因高表达后,通过Western bolting验证相应的Hedgehog信号通路重要因子SHh、GLi、及Cyclin E的蛋白表达情况较对照组细胞蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);4.转染组前列腺癌细胞Numb基因高表达后,Real-time PCR验证前列腺癌细胞Hedgehog信号通路重要因子SHh、GLi、及Cyclin E的m RNA表达较对照组前列腺癌细胞m RNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);5.转染组前列腺癌细胞Numb基因高表达后,通过细胞信号通路Hedgehog通路进行调控,细胞增殖出现停滞,细胞周期停滞在G1期,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.Numb-Sa RNA转染入人前列腺癌PC-3细胞后能使numb在PC-3细胞中获得稳定表达;2.实验组PC-3细胞中numb表达升高后,Hh信号通路重要因子SHh、GLi及Cyclin E的表达较对照组明显降低;3.numb蛋白可能通过Hh信号通路影响AIPC细胞的增殖。