背景胆管细胞癌可以依据肿瘤位置分为肝内胆管细胞癌和肝外胆管细胞癌两种。发生在远离左右肝管汇合部肝脏内部的肿瘤称为肝内胆管细胞癌(ICC),ICC是由二级胆管及其分支被覆上皮细胞癌变而发生的腺癌。ICC在组织病理学上可分为高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌和未分化腺癌、鳞腺癌等几种。统计表明ICC是第二大常见的肝脏恶性肿瘤,约占肝脏恶性肿瘤的5%~15%。研究表明,近年来ICC的发病率和死亡率均呈上升趋势。其中,中国人ICC发病患者人数约占全球ICC发病总人数的55%。ICC恶性程度较大,预后通常不佳,5年生存率低于5%,平均生存期仅为4-6个月。目前ICC治疗主要以手术为主。虽然患者行根治性手术切除术后5年生存率较低。但尽早行根治性手术切除仍然是唯一有效的治疗方案。目前行R0手术切除后,即切缘无肿瘤侵犯,患者手术后3年生存率可达到35.6%,5年生存率可达20.1%。肝移植治疗ICC目前尚有争议。由于多数患者首次就医时已是肿瘤进展期,因此失去了行根治性手术切除的机会。虽然过去的几十年间,手术患者1年生存率有了较大的提高,但5年生存率没有显著性变化。目前根治性手术切除术后5年的生存率比肝细胞癌(HCC)差。已有研究表明,ICC发病可能与纤维性多囊性肝病、肝炎病毒感染、原发性硬化性胆管炎(Primary Sclerosing Cholangitis,PSC)、肝内胆管结石、寄化学致癌物的接触、生虫感染、肥胖、糖尿病、吸烟等有关。目前对于ICC发病的机制的研究还够深入,具体机制尚不明确。前期的研究表明:胆汁淤积长时间刺激胆管上皮细胞及慢性胆道炎症对胆道上皮的刺激,会引起炎症因子的释放以及生长因子的激活,从而引起细胞增殖、凋亡相关基因调控的失衡,导致细胞肿瘤性增殖。涉及的信号通路有:MAPK、HGF、STAT、met、IL-6、EGF、c-erbB-2、p53等。引起的细胞学改变包括凋亡逃避、无限增殖、侵袭转移能力增强、促血管生成等。相比于肝细胞癌的研究,对于ICC的形成机制、生物学特征、关键因素和临床预后等方面的研究还有存在较大差距,所以进一步研究和探索ICC发病机制具有十分现实的意义。RMP(RPB5-mediating protein、RPB5调节蛋白)是RNA聚合酶II第5亚基(RPB5)的调节蛋白,又称为C19orf2或URI。是由Cheong等科学家采用重组人RPB5探针在肝癌细胞株cDNA文库中克隆出的一个RPB5调节蛋白。后期研究发现RMP在基因转录、基因组稳定、细胞凋亡以及卵巢癌、子宫内膜癌、胃癌等肿瘤的发生发展中均起到很重要作用,具体机制需进一步研究。总结已明确的RMP的生物学功能如下:(1)RMP在基因转录的调节中起作用:RMP是乙型肝炎病毒X蛋白和转录因子IIB(TFIIB)的结合蛋白,可能是参与RNA聚合酶II转录活性的一个基团。另外,RMP可以与TFIIF结合,补充调节转录活性。还有研究表明RMP与mTOR依赖的营养调控代谢有关;(2)RMP在细胞凋亡中起作用:研究表明,RMP可与PP1γ在线粒体上形成复合物,从而影响S6kinase 1(S6K1)所介导的信号通路;(3)RMP在HCC细胞中起作用:研究表明RMP在HCC中可起到放疗抵抗作用,从而可以影响HCC细胞系的生长、凋亡。最近有实验发现RMP在HCC中呈现表达水平高,使用干扰技术抑制RMP在HCC中的表达后,发现HCC细胞的生长和进入到G2/M期细胞的比例受到明显抑制,并且可以显著抑制HCC细胞克隆形成能力和降低或完全抑制HCC细胞的体内成瘤能力。RMP的高表达和HCC患者的临床病理特点及预后相关。肿瘤中的RMP水平可以很好的用来评估HCC患者的预后,并且可以用来协助选择哪类患者行辅助TACE治疗有益于避免复发。目前关于RMP在肝内胆管细胞癌中的表达情况及RMP对ICC细胞生长、转移、侵袭能力的影响尚未见到报道。目的我们前期预实验免疫组化结果表明,ICC中RMP也处于明显高表达水平。由此我们预测,RMP可能在ICC的肿瘤发生、发展过程中也起着十分重要的作用。通过本次实验,验证在大样本中,ICC患者组织中RMP的表达情况及与预后的关系,并进一步验证RMP的表达对ICC细胞迁移、侵袭和增殖等的影响。从而可以推测RMP可以作为肝内胆管细胞癌的一个预后指标。方法1、本次研究共纳入462例诊断为肝内胆管细胞癌,术后病理诊断证实为肝内胆管细胞癌的患者。排除术后病理为肝内胆管细胞癌混合肝细胞癌的患者,总结患者临床病理资料,术后进行随访,主要记录患者肿瘤复发情况及生存状态。2、主要通过免疫组化的方法(Immunohistochemistry,IHC)检测RMP在肝内胆管细胞癌癌旁组织和癌组织中的表达情况。3、使用徕卡公司的DM IRE2显微镜观察ICC患者免疫组化切片,并用该公司FC420型CCD摄像机在100倍放大镜下进行拍照,存贮照片。4、使用Image-Pro Plus v6.0 software(Media Cylernetics,Bethesda,MD.USA)软件,对已拍照处理的ICC免疫组化切片照片取IOD值,并测量面积(area),求得其IOD/area值,科学计算每一张免疫组化片的平均IOD值。5、使用IBM SPSS Statistics 22.0(IBM,Chicago,IL)、X-tile方法、卡方检验、预后分析、单因素多因素cox分析、ROC曲线等统计方法分析ICC患者RMP免疫组化IOD/area与临床病理资料的关系,明确RMP对肝内胆管细胞癌预后的影响。6、进一步通过RMP干扰的方法,观察对于肝内胆管细胞癌的生物学行为的影响,进一步明确RMP干扰对于肝内胆管细胞癌迁移、侵袭及增殖的影响,为进一步研究具体机制积累数据支持。结果1、RMP在肝内胆管细胞癌组织样本免疫组化结果显示:无论在肿瘤细胞核还是在细胞浆中均有较高表达。2、RMP免疫组化切片经Image-Pro Plus v6.0 software取IOD值,测量面积(area),求得其IOD/area值,结果显示RMP肝内胆管细胞癌癌组织中表达明显高于癌旁组织。3、通过单、多因素Cox分析后发现,在462例行肝切除手术的肝内胆管细胞癌患者中,肿瘤大小(HR:1.667;95%CI:1.317-2.110)、肿瘤数目(HR:1.558;95%CI:1.198-2.026)、TNM分期(HR:1.209;95%CI:1.086-1.347)、血清CEA含量(HR:1.369;95%CI:1.060-1.768)是影响患者术后总生存时间的独立危险因素;肿瘤大小(HR:1.953;95%CI:1.497-2.549)、肿瘤数目(HR:1.636;95%CI:1.228-2.179)、TNM分期(HR:1.207;95%CI:1.070-1.361)、RMP的含量(IOD/area)(HR:1.493;95%CI:1.046-2.130)是影响患者术后复发的独立危险因素。肝内胆管细胞癌患者组织切片中的RMP表达水平的差异,对患者术后复发的影响有明显的统计学差异。4、通过RMP干扰,结果显示干扰RMP的胆管细胞癌细胞的迁移能力、侵袭能力和增殖能力明显下降,说明RMP在胆管细胞癌的生长、转移过程中发挥着比价重要的作用。结论本研究证实RMP在肝内胆管细胞癌中表达水平高,其高表达与患者的术后复发相关,是ICC患者术后复发的一个独立危险因素。RMP在胆管细胞癌的生长、转移过程中发挥着比价重要的作用。本研究提示,RMP可以作为一个肝内胆管细胞癌复发的可靠的预测标志物。