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一．EPO抗乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的实验研究目的建立乳鼠心肌细胞H／R模型，观察EPO对心肌细胞H／R损伤的保护作用，揭示EPO抗心肌细胞H／R损伤的机制，探讨其作用的信号通路。方法1．进行乳鼠心肌细胞的原代分离纯化，建立细胞H／R模型。实验分组包括空白组，对照组，EPOL组，EPOM组，EPOH组，UO126组。2．MTT法检测细胞存活率；比色法检测上清液LDH，CK-MB。3．TUNEL法及Annexin-V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率。4．TBA法测定细胞内MDA含量，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。5．Western法测定细胞ERK1／2及磷酸化ERK1／2蛋白含量。结果1．H／R损伤导致心肌细胞膜通透性增加，存活率下降，凋亡率增加，MDA含量升高，SOD活性降低，而一定浓度的EPO显著减少心肌酶的释放，提高心肌细胞活性，减轻细胞凋亡，提高SOD活性。2．各组ERK1／2蛋白的表达总量无明显差异；而在H／R损伤和外源性EPO的作用下，磷酸化ERK1／2蛋白含量增加。结论EPO在体外对心肌细胞H／R损伤有一定的保护作用，与其抑制心肌细胞凋亡，减少氧自由基生成有关，且可能是通过启动ERK1／2通路信号转导进行。二．Langendorff模型下EPO抗心肌缺血再灌注损伤的实验研究目的建立Langendorff离体心脏灌注模型，观察不同剂量的EPO预处理对离体心脏血流动力学等指标的影响，评价EPO对MIRI的保护作用，通过检测凋亡相关基因的蛋白表达，测定炎症因子mRNA含量变化，探讨EPO对MIRI保护作用的分子生物学机制。方法1．建立Langendorff离体心脏灌注模型，分组包括，空白组，对照组，EPOL组，EPOM组，EPOH组。2．记录心功能参数：HR，LVSP，±dp／dtmax，及CF。3．检测冠脉流液中LDH，CK含量。4．免疫组化法检测Bax，Bcl-2，NF—κB P65的蛋白表达。5．荧光实时定量PCR法测定TNF—α，IL—1β，ICAM-1的mRNA水平。结果1．MIRI对心功能有负性影响，心肌酶释放增加；一定浓度的EPO增加心肌收缩力，改善心肌舒张功能，扩张冠脉血管。2．MIRI诱导心肌细胞凋亡，而EPO能通过差异调节Bcl-2和Bax的蛋白表达抑制凋亡。3．心肌组织经过MIRI后，NF-κB发生活化，致炎因子基因转录水平增高，而EPO能抑制相关作用。结论一定浓度EPO对离体心脏的MIRI有保护作用，其机制与抑制心肌细胞凋亡，调控NF-κB的活化并减轻致炎因子介导的心肌炎症反应相关。三．在体模型下EPO抗心肌缺血再灌注损伤的实验研究目的建立大鼠MIRI在体模型，记录血流动力学指标，统计心律失常情况，测定血清心肌酶谱值，观察心肌超微结构，研究EPO对大鼠MIRI的影响。方法1．建立大鼠MIRI在体模型，实验分组包括：空白组，I／R组，EPO组。2．连续心电监测并记录各时间点出现的心律失常。3．生物信号采集处理系统记录HR，LVSP，±dp／dtmax。4．检测血清AST，CK-MB，LDH。5．电镜下观察左心室组织超微结构。结果MIRI诱导严重心律失常的发生率升高，心肌的收缩和舒张功能损伤，心肌酶释放增加，并破坏细胞超微结构；而EPO降低心律失常发生率，改善心功能，减轻生物膜损伤，保护心肌细胞的超微结构。结论EPO对在体模型上的大鼠MIRI具明显的保护作用。