ALK5抑制剂对TGF-β1致视网膜色素上皮细胞纤维化的影响

来源 :锦州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bonkoliu
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目的本次实验旨在探讨转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-beta1,TGF-β1)对人视网膜色素上皮(Retinal Pigment Epithelial,RPE)细胞向成纤维细胞转化的影响,及ALK5抑制剂对这一影响的干预作用。方法体外培养人RPE细胞,随机分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+SB-431542组、SB-431542组。对照组不做任何处理,其余三组分别用10μg/L TGF-β1、10μg/L TGF-β1+30μmol/L SB-431542、30μmol/L SB-431542处理24h。MTT法检测不同组别RPE细胞增殖率;划痕试验观察各不同组别0h、12h、24h RPE细胞迁移情况;免疫荧光法检测不同组别细胞ALK5蛋白的分布和表达;Western blot法检测各不同组别活化素受体样激酶5(activated receptor kinase 5,ALK5)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)以及纤维粘连素(fibronectin,FN)蛋白的表达。结果与对照组相比,TGF-β1作用于RPE细胞24h后,可改变RPE细胞表型,使其呈成纤维细胞样外观,并明显促进RPE细胞增殖和迁移,TGF-β1作用24h后RPE细胞增殖率为对照组的(1.33±0.08)倍,而SB-431542能够抑制TGF-β1的上述作用,30μmol/L SB-431542作用24h后RPE细胞增殖率为TGF-β1组的(67.77±6.78)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。经TGF-β1作用24h后RPE细胞内ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白的表达显著上调,分别是对照组的(3.69±0.37)倍、(1.76±0.05)倍、(2.58±0.18)倍、(1.86±0.11)倍、(1.74±0.08)倍;SB-431542可逆转TGF-β1诱导的ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白表达上调,分别是TGF-β1组的(67.73±5.15)%、(71.71±3.50)%、(79.87±0.05)%、(63.59±3.16)%、(83.07±2.31)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β1可促进RPE细胞增殖、迁移,向成纤维细胞转化,并能上调RPE细胞内ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白的表达;SB-431542可通过抑制ALK5从而干预TGF-β1致RPE细胞纤维化的作用。
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