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目的Kelch-like 6(KLHL6)基因是通过构建人cDNA文库以及进行大规模测序分析后发现的,与许多Kelch家族成员的核酸及蛋白成分都有很高同源性,是与慢性淋巴细胞白血病相关的特定人类癌基因。KLHL6在胃癌中尚未被研究,我们的课题主要是研究胃癌组织和相对应癌旁非肿瘤组织中KLHL6的表达水平及变化;探究胃癌患者临床病理特征和胃癌组织中KLHL6表达水平之间的关系;检测KLHL6在人不同胃癌细胞株(HGC-27,MGC-803,SGC-7901,BGC-823,SUN-1,KATO-III和AGS)和人正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达差异;另外,通过下调KLHL6在胃癌细胞中的表达后进行增殖、迁移、侵袭实验,了解KLHL6基因对胃癌细胞生物学行为特征的影响。方法收集2003年11月至2007年9月间就诊于天津医科大学肿瘤医院胃部肿瘤科接受胃癌根治手术,术后病理证实为胃癌的患者术后组织蜡块切片84例和对应的完整的临床随访资料,组织蜡块切片包括癌组织和癌旁非肿瘤组织;收集2000年3月至2010年6月就诊于天津市西青医院的良性胃病患者(15例萎缩性胃炎和15例胃不典型增生)的组织蜡块切片。采用免疫组织化学(immunohistochemistry)方法检测KLHL6蛋白水平在收集的84例胃癌患者的癌组织和癌旁非肿瘤组织中的表达情况。分析KLHL6蛋白表达和预后之间的关系,以及和胃癌患者临床病理特征之间的关系。应用免疫组织化学的方法检测良性胃病患者15例萎缩性胃炎组织和15例胃不典型增生组织中KLHL6蛋白水平的表达情况。采用半定量逆转录聚合链反应(Semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain react)方法检测KLHL6 mRNA水平在不同人胃癌细胞株及人正常胃黏膜细胞中的表达情况;Western blot方法检测KLHL6蛋白水平在不同人胃癌细胞株与人正常胃黏膜细胞中的表达情况。转染KLHL6干扰质粒到人胃癌细胞(MGC-803-pRNATH1.1/Shuttle-cGFP–KLHL6 shRNA),行细胞克隆实验、Dimethylthiazolyl-2-5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)法细胞活性测定、划痕实验和Transwell侵袭实验,探究KLHL6基因对胃癌细胞生物学行为特征的影响。结果1.KLHL6蛋白在胃癌组织标本(84例)中的阳性表达率为42.86%,KLHL6蛋白在对应的癌旁非肿瘤组织(84例)中的阳性表达率为4.76%,其差别在统计学上有意义(P<0.001)。2.KLHL6蛋白在萎缩性胃炎组织标本(15例)中的阳性表达率为6.67%,KLHL6蛋白在胃不典型增生组织标本(15例)中的阳性表达率为13.33%。3.通过半定量逆转录聚合链反应技术检测KLHL6 mRNA表达在人胃癌细胞株(HGC-27,MGC-803,SGC-7901,BGC-823,SUN-1,KATO-III和AGS)中的表达都高于人正常胃黏膜细胞GES-1(P<0.05);通过Western blot法检测KLHL6蛋白表达在人胃癌细胞株(HGC-27,MGC-803,SGC-7901,BGC-823,SUN-1,KATO-III和AGS)中的表达均高于人正常胃黏膜细胞GES-1(P<0.05)。4.通过对搜集的胃癌患者(84例)的随访资料进行单因素生存分析,结果表明:患者手术时的年龄、阳性转移淋巴结数目、KLHL6蛋白的表达水平、肿瘤的大小与胃癌患者的预后密切相关(P<0.05);通过对搜集的胃癌患者(84例)的随访资料行COX模型分析表明KLHL6蛋白的表达、肿瘤的大小和阳性转移淋巴结数目是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。5.KLHL6干扰质粒转染人胃癌细胞MGC-803后,经细胞克隆实验和MTT比色法证实其细胞增殖力和细胞活力均明显较对照组细胞降低(P<0.05);经划痕实验和Transwell侵袭实验证实其细胞迁移能力和侵袭能力均明显较对照组细胞降低。结论1.KLHL6的表达与胃癌的发生发展相关,由此推测KLHL6在胃癌的发生发展中起一定作用。2.KLHL6蛋白表达水平是影响胃癌根治术后患者的独立危险因素。KLHL6蛋白高表达的胃癌患者预后较差,因此KLHL6蛋白表达可作为胃癌患者预后的预测指标之一。3.KLHL6在胃癌的发生和进展中具有明显的促进作用,其机制涉及到肿瘤细胞增殖活力、迁移侵袭多个方面。