土藤草颗粒中含有忍冬藤、虎杖、土茯苓、大血藤、黄柏、金钱草、白芷、没药，具有清热解毒、利湿降浊、化瘀散结、消肿止痛的功效，常用于急性痛风性关节炎所导致的关节红肿疼痛，不便活动等症状，也可应用于发热，伴有腰痛，尿浊等肾损害症状。临床上原方为汤剂，用于急性痛风病症有煎煮、存放不便，不易携带等缺点，故根据处方量及临床应用经验，综合考虑了口服制剂的优缺点，选择制成颗粒剂，既可保持汤剂吸收快、作用迅速的优点，又使得生产、运输、贮藏、携带、使用均方便，是治疗急性痛风病症的理想剂型。　　目的:　　以保存原方疗效为原则，对其进行1.生产制备工艺的研究，将原方汤剂改良成有效、方便、接受性好的土藤草颗粒;2.建立质量标准，为土藤草颗粒生产过程中的质量把控奠定基础;3.进行影响因素试验、加速和长期稳定性实验，考察土藤草颗粒的稳定性，对土藤草颗粒的质量进行宏观把控。　　方法:　　提取工艺的研究:通过文献查阅所得方中的主要药味有效成分的性质，对提取工艺路线进行初步设计，拟定了三条路线:1.全方水煎;2.虎杖、黄柏、白芷、没药乙醇提取，忍冬藤、土茯苓、大血藤、金钱草水提;3.白芷、没药提取挥发油，其余药味水提。经药效学盲法实验筛选，得到最佳工艺路线为3号。水提部分通过L9(34)正交实验，以马钱苷、绿原酸、虎杖苷、盐酸黄柏碱、落新妇苷、盐酸小檗碱的含量以及浸膏得率为综合评价指标，马钱苷、绿原酸、虎杖苷、盐酸黄柏碱、落新妇苷、盐酸小檗碱HPLC测定条件为Welch，Ultimate Phenyl-Ether(4.6×250mm5μm)色谱柱，以0.1％磷酸为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱，0～10min90％A～90％A,10％B～10％B;10～30min90％A～80％A,10％B～20％B;30～55min80％A～55％A，20％B～45％B。柱温为30±2℃，流速为1min mL-1，检测波长为237nm;提取白芷和没药挥发油部分，通过单因素考察法，以欧前胡素的含量和出油率为指标，欧前胡素HPLC含量测定条件为月旭C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为水-乙腈(45∶55)，流速为1min mL-1，检测波长为254nm。对最佳工艺所提得挥发油进行包合工艺考察，以挥发油回收率和β-榄香烯的含量为指标，β-榄香烯气相测定方法为色谱柱为HP-5.5％Phenyl Methyl Siloxan毛细管色谱(30×320μm×0.25μm)，载气为高纯度氦气，流速8mL·min-1，进口温度为250℃，分流进样分流比1∶5，进样量1μL，起始温度为100℃，以5℃·min-1的速度从升温到250℃。　　醇沉、干燥、成型工艺优选:以马钱苷、绿原酸、虎杖苷、盐酸黄柏碱、落新妇苷、盐酸小檗碱的含量为指标，用单因素考察法，考察了不同的醇沉前药液密度、醇沉后乙醇浓度，考察了干燥工艺中干燥方法（微波干燥、喷雾干燥和真空干燥）和干燥前的药液密度。以颗粒成型率、吸湿率和流动性为指标考察成型工艺，对添加辅料的种类、添加比例和干压压力进行考察，并考察了矫味剂种类、比例。　　质量标准的建立:对土藤草颗粒中的忍冬藤、土茯苓、黄柏、大血藤、金钱草、虎杖、没药用薄层色谱法进行定性鉴别。以君药忍冬藤中马钱苷、虎杖中虎杖苷为土藤草颗粒质量评价的含量测定对象，色谱条件为:采用Welch，Ultimate Phenyl-Ether(4.6×250mm5μm)色谱柱，以5％异丙醇为A相，15％异丙醇为B相，进行梯度洗脱，0～30min100％A～100％A，0％B～0％B;30～31min100％A～0％A，0％B～100％B;31-60min0％A～0％A，100％B～100％B。进行提取方法、提取溶剂、溶剂倍数和提取时间的样品前处理方法的考察。建立了土藤草颗粒中马钱苷、虎杖苷HPLC含量测定的方法，并进行了方法学考察，包括精密度、重复性、稳定性、线性和加样回收。用所建色谱条件测定样品中马钱苷、虎杖苷的含量。　　稳定性考察:影响因素实验考察了高温(60℃)、强光照(光照强度为4500±500lx)、高湿（95％、75％湿度环境）条件下对土藤草颗粒外观及内在成分的影响;加速稳定性试验将三批中试产品置于40℃±2℃、RH75％±5％的恒温恒湿培养箱中，在第0，1，2，3，6个月末取样，分别对颗粒剂中马钱苷和虎杖苷进行HPLC含量测定，薄层定性检查及其他检查项目;长期稳定性将三批中试产品置于25℃±2℃、RH60％±10％的条件下放置24个月，分别于0，3，6，9，12，18，24个月末取样，分别对颗粒剂中马钱苷和虎杖苷进行HPLC含量测定，薄层定性鉴别和其他颗粒剂项下检查项目。　　白芷、没药单煎与合煎对白芷中欧前胡素含量及镇痛作用的影响:用1次8倍水煎1h，2次6倍水30min水煎工艺得到白芷单煎液、没药单煎液、没药白芷合煎液。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS)，色谱条件为ZORBAX SB-C18色谱柱(2.1mm×150mm，5μm)，流动相乙腈-水(55∶45)，流速0.3mL·min-1，柱温35℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI)，正离子扫描模式，单离子监测(SIM)测定比较三种不同提取液中欧前胡素含量。小鼠分为空白组、阳性组（氨酚双氢可待因）和3种水煎液的低、中、高组，阳性药给药剂量为0.24g·kg-1·d-1，白芷单煎液按3，6，12g·kg-1·d-1，没药单煎液按1.5，3，6g·kg-1·d-1，白芷没药合煎液按4.5，9，18g·kg-1·d-1为低、中、高给药剂量，分别灌胃给药7d后进行热板试验和扭体试验，记录舔足时间和观察扭体次数。　　结果:　　提取工艺的研究:通过盲法药效实验筛选，确定了白芷、没药提取挥发油，其余药味水提的工艺路线。最终得出水提工艺路线为:第1次加水10倍提取1h，第2次加水8倍，提取1h。确定了提取挥发油的最佳方案为:粉碎成粗粒，提取2次，第1次加水6倍提取挥发油6h，第2次加水4倍煎煮1h，两次所得水煎液与上述水提取部分药液合并。确定了挥发油最佳包合工艺:添加10倍β-环糊精，胶体磨法包合。　　醇沉、干燥、成型工艺优选:最佳醇沉工艺为提取液浓缩到密度为1.08，加95％乙醇醇沉，至醇沉后药液中乙醇浓度为70％。选择喷雾干燥法，喷雾前药液密度为1.09，加糊精量为生药量2.8％。干燥后所得干膏粉添加50％混合种类辅料（乳糖∶糊精=3∶7），另添加0.5％硬脂酸镁作为润滑剂，0.2％三氯蔗糖作为矫味剂，混匀，干压制粒，干压压力为50kg。　　质量标准的建立:样品处理方法的考察后所选最佳方法为:取成品粉末0.5g，加入甲醇25mL，超声提取30min。方法学考察结果精密度、重复性、稳定性均良好，RSD符合规定，马钱苷线性范围在0.14～2.04μg(R2=1)，虎杖苷的线性范围在0.11～1.68μg(R2=1)线性良好，考察了50％、100％、150％的加样回收率，马钱苷的平均回收率为103.82％(RSD2.50％)，虎杖苷的平均回收率为99.98％(RSD2.63％)符合2015版《中国药典》规定要求。薄层定性鉴别了忍冬藤、虎杖、黄柏、金钱草、大血藤、没药，所建立的方法斑点清晰、专属性好且阴性样品无干扰。　　稳定性考察:影响因素试验表明，土藤草颗粒在高温及光照条件下，外观及内在质量基本无变化，高湿环境下吸湿增重较明显，应采用密闭保存方法如铝塑薄膜包装。对三批中试产品进行加速及长期实验，目前加速稳定性各项检查均符合要求，剩余月份有待检验。　　白芷、没药单煎与合煎对白芷中欧前胡素含量及镇痛作用的影响:欧前胡素在0.02～0.20μg·mL-1范围内峰面积与浓度呈良好线性关系(R2=0.9911)，测得欧前胡素在白芷单煎液中转移率仅为0.62％，在白芷没药合煎液中转移率提高至2.00％;热板法中单煎、合煎液各剂量与空白组比较均有显著性差异(P＜0.05)。扭体法白芷单煎液低、中剂量，没药高剂量和合煎液各剂量与空白组比较有显著性差异(P＜0.05)。白芷与没药合煎能促进白芷中欧前胡素的溶出。单煎、合煎液各剂量组均能延长小鼠热板舔足时间，合煎液各剂量组均能延长扭体潜伏时间，合煎液高剂量组对扭体法镇痛抑制率最高。　　结论:　　经过制备工艺考察、中试放大生产和质量标准的研究，建立了土藤草颗粒科学有效的制备方法，其制备工艺可行，产品稳定性好，适合生产。并建立了简单、有效的质量控制方法，能在生产过程中全面控制土藤草颗粒生产质量。