猴头菌粉降血糖物质基础研究

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本论文以猴头菌粉(多孔菌目齿菌科猴头菌Hericium erinaceus (Bull. ex Fr.) Pers.深层发酵的培养物经分离、提取、干燥而得)为研究对象,以降血糖活性为指标筛选其活性部位;对活性部位(粗多糖部位)进行降糖作用验证,探讨其降糖机制;并从活性部位分离出均一相对分子质量多糖;初步阐明猴头菌粉降血糖作用的物质基础,为猴头菌粉的后期开发提供科学数据和研究支持。本论文主要研究内容及成果如下:1.猴头菌粉降血糖活性筛选。通过化学成分系统预试验,研究猴头菌粉可能含有的化学成分。结果显示猴头菌粉含有蛋白质类、有机酸类、糖及苷类、挥发油类、酚类并且有内酯结构的存在。将猴头菌粉水提部位、粗多糖部位和95%乙醇提取部位进行降血糖活性筛选。结果显示,猴头菌粉粗多糖(200mg·kg-1)口服2周内能明显降低糖尿病小鼠的空腹血糖,与模型组相比较有极显著性下降(P<0.01)。并能改善模型小鼠的一般情况、对抗糖尿病小鼠的体重减轻。得出猴头菌粉多糖是猴头菌粉降血糖活性部位。2.猴头菌粉多糖的提取工艺及含量测定。采用单因素实验结合正交实验优化猴头菌粉多糖的提取工艺,得到猴头菌粉多糖的最佳提取工艺:猴头菌粉以20倍蒸馏水浸渍15min,70℃水浴回流提取2次,每次2h,过滤后浓缩至4倍生药量,醇沉浓度为80%,猴头菌粉多糖的提取率可达22.72%。采用苯酚-硫酸法测定猴头菌粉粗多糖的总糖含量为24.29%,(除蛋白后)精制多糖的总糖含量为48.08%。采用考马斯亮蓝法测定猴头菌粉粗多糖的蛋白含量为4.94%,精制多糖的蛋白含量为2.63%。3.猴头菌粉多糖的降血糖活性研究应用2型糖尿病小鼠模型,肾上腺素引致小鼠高血糖模型和2型糖尿病大鼠模型,进一步确认猴头菌粉多糖的降血糖作用。实验结果显示猴头菌粉多糖能有效对抗模型鼠体重减轻,显著降低模型鼠血糖值,有效调节模型鼠的血脂紊乱,保护模型鼠的肝脏、肾脏和胰腺,提高糖尿病模型鼠的葡萄糖耐受量和抗氧化能力。4.猴头菌粉多糖的分离纯化、理化性质及结构研究分离、纯化猴头菌粉多糖,并研究其理化性质及组成结构。猴头菌粉多糖经乙醇分部醇沉得到不同醇沉部位的精制多糖HEJP30.HEJP60和HEJP80.经DEAE—纤维素色谱柱和SephadeX-100进一步分离,分离得到一个均一相对分子质量多糖——80a。通过HPLC.ELSD凝胶排阻色谱法分析了多糖的相对分子质量和单糖组成。猴头菌粉精多糖的3个主要相对分子质量段分别为:1264263-13936195Da;265667-1121301Da:944-70969Da.80a为一相对分子质量3487Da的葡聚糖。80a的红外光谱显示80a为a构型。
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