凉血活血与益气活血中药对放射性肺纤维化防治机制的研究

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目的:模拟临床放射治疗的过程,建立放射性肺纤维化的模型,用凉血活血与益气活血中药对其进行干预,通过观察大鼠肺脏的组织学改变及相关细胞因子的变化,评价凉血活血与益气活血中药对放射性肺纤维化的治疗作用,并探讨其可能存在的作用机制,以期指导临床。  方法:取80只SD大鼠,体重180-200g,随机分成单纯照射组(A组),凉血活血组(B组),益气活血组(C组)和空白对照组(D组),每组20只,雌雄各半。由当归、赤芍、生地、桃仁、麦冬、五味子及甘草组成的凉血活血方和以黄芪、人参、当归、麦冬、五味子及甘草组成的益气活血方,按传统煎药法煎取药液,以恒温水浴锅浓缩成含生药1.25g/mL的汤剂,真空包装,4℃冰箱保存。于照射开始时同步灌胃法给药,B组按12.7g/kg的剂量给药,C组按14g/kg的剂量给药,每天一次,A组和D组大鼠同期每天给予1ml/100g生理盐水灌胃。每天观察大鼠活动、眼鼻、进食、大便等基本情况,每周称量体重调整给药量。A、B、C三组给予每周两次,每次3Gy剂量的右肺照射,累计照射剂量达30Gy。于放射开始后第26周对大鼠各部位的血流情况进行采集,然后全部处死,腹主动脉采血,用于血清的制备。运用细胞因子定量检测芯片、信号通路检测芯片筛选出凉血活血和益气活血药治疗放射性肺纤维化模型大鼠后相关因子的改变,筛选出可能的因子。在此基础上,通过剖胸观察胸腔及双肺大体标本情况后,取出右肺,透射电镜观察Ⅰ、Ⅱ型上皮细胞,巨噬细胞等肺泡内细胞及胶原纤维的变化;HE染色、免疫组化染色观察肺脏病理改变及TLR4/MyD88/NF-kB-IL-1β这一通路中相关因子的表达,探讨中药可能的作用机制,采用SPSS19.0统计软件进行统计学处理。  结果:通过活体观察发现,与用药组相比,单纯照射组大鼠精神萎靡、进食量减少、活动度降低、鼻周红赤、眼周黄色分泌物、大便干硬等表现出现较早,且持续时间较长;用药组之间相比,在照射初期,凉血活血药物组大鼠一般状态较好,而到后期,益气活血药物组则表现较好。模型在活体表现出了初期热伤血络及后期气阴双虚的中医证候特点。对大鼠各部位血流情况采集结果发现,益气活血药物组大鼠腹部的血流较旺盛(P<0.05),其余三组无明显差异。大体标本观察发现,单纯照射组肺组织暗红,表现散在大量苍白色点灶。用药组则相对较好,益气活血组与凉血活血组相比,肺组织表明较平滑。透射电镜观察发现单纯照射组肺泡腔狭窄明显,肺间隔充斥着大量的胶原纤维,Ⅱ型肺泡上皮细胞脱落,并含有少量的浆细胞。用药组则相对较好,益气活血组与凉血活血组相比,其胶原纤维面积相对较小。HE染色结果表示,与用药组相比,单纯照射组肺泡结构紊乱,并有大量的胶原纤维沉着,用药组相对较好。免疫组织化学法染色结果发现单纯照射组TLR4、MyD88、NF-kB及IL-1β的表达均较高,用药组之间相比,益气活血组比凉血活血组表达较低。  结论:.小剂量多次照射可成功建立放射性肺损伤的模型,模型较稳定,具有可重复性;有利于观察中医证候特点,且这种造模过程符合临床实际,实用性好。  应用凉血活血和益气活血中药对放射性肺纤维化大鼠进行干预,其纤维化出现的时间较晚,且程度较轻,针对放射性肺纤维化时期出现的气阴双虚的证候特点,益气活血中药更具有一定的优势。TLR4/MyD88/NF-kB-IL-1β是经典的炎症信号通路,凉血活血和益气活血中药可降低其相关因子的表达,这可能是其减轻炎症反应,从而延缓放射性肺纤维化的进展的可能的作用机制之一。其中,益气活血中药的效果较明显。
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