奥曲肽联合奥沙利铂对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的实验研究

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目的研究奥曲肽(Octreotide, OCT)与奥沙利铂(Oxaliplatin, L-OHP)联合应用在体外对人结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制,为奥曲肽可能作为治疗结肠癌的一种辅助抗癌药物提供实验依据和理论依据。方法实验分四组:空白对照组、奥曲肽单药组、奥沙利铂单药组及奥曲肽+奥沙利铂联合用药组。将不同浓度的奥曲肽、奥沙利铂和一定浓度的奥曲肽联合奥沙利铂作用于体外培养的人结肠癌细胞株SW480,1.采用MTT法检测各组结肠癌细胞株SW480增殖情况;2.用DAPI检测各组细胞的凋亡改变;3.使用流式细胞术(flowcytometry, FCM)分析药物作用后各组细胞周期及凋亡率的改变;4.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞bax、fas、bcl-2基因的变化。结果1.奥曲肽、奥沙利铂单药组对人结肠癌细胞株SW480增殖均有明显的抑制作用(P<0.01),且随着浓度的提高抑制率也随之提高。但奥曲肽在25μg/l浓度以上时,对细胞的抑制作用无明显差异(P>0.05)。奥曲肽联合奥沙利铂组对人结肠癌细胞株SW480的抑制作用明显强于单独用药组(P<0.01);2.本实验发现早期凋亡细胞的核染色质呈核浓缩状态,染色加深,或核染色质呈新月形聚集于核膜一边;晚期凋亡细胞的细胞核碎裂成大小不等的圆形小体,并被细胞膜所包绕,即凋亡小体;在联合用药组中,这种现象更加明显;3. FCM结果表明:奥沙利铂组细胞周期中DNA合成期(S期)细胞比例增加(P<0.01);奥曲肽组细胞周期中DNA合成前期(G0/G1)细胞比例增加(P<0.01);联合组细胞周期中DNA合成期(S期)细胞比例增加(P<0.01),且与奥沙利铂组相比差异仍有统计学意义(P<0.01);4. FCM结果表明:对照组凋亡率为6.28±0.23%;奥沙利铂(12.5μg/ml)组凋亡率为10.07±0.53%;奥曲肽(25.0μg/l)组凋亡率为10.63±0.14%;联合组凋亡率为15.45±0.41%。与对照组的细胞凋亡率相比,奥沙利铂组、奥曲肽组、联合组均有所增加,且差异具有统计学意义(P<0.05);联合组的细胞凋亡率大于奥沙利铂组、奥曲肽组,差异具有统计学意义(P<0.05);5. RT-PCR检测结果显示:与对照组、奥曲肽组、奥沙利铂组相比,联合组baxmRNA、fas mRNA表达显著高于对照组和单独用药组,差异有统计学意义(P<0.01);联合组bcl-2mRNA表达显著低于对照组和单独用药组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论奥曲肽和奥沙利铂联合应用具有明显的协同抗结肠癌细胞SW480增殖的作用,其机制可能与上调bax、fas基因和下调bcl-2基因表达,诱导细胞凋亡有关。
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