长双歧杆菌XY01生理特性和比较蛋白质组学研究

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长双歧杆菌XY01(B. longum XY01)是一株益生性优异的药用菌株,菌株特异性明显,研究其生理生化特性及蛋白质组学,注释分泌蛋白及差异蛋白信息具有一定的理论意义和潜在的应用价值。论文以已测序菌株B. longum NCC2705为对照,B. longum XY01为研究对象,分别制备不同时期分泌蛋白和全细胞蛋白样品,利用双向电泳和质谱技术研究其分泌蛋白及差异蛋白功能信息,并对两菌株的生理生化特性进行深入研究,取得了以下主要结果:B. longum XY01和B. longum NCC2705发酵液对Micrococcus flavus NCIB8166的生长有很强的抑制活性,B. longum XY01抑菌活性较高;气相色谱测得B. longum XY01发酵液中乳酸含量为6.44g/L,乙酸为3.81g/L,而B. longum NCC2705中乳酸含量为7.25g/L,乙酸含量极低;另外,B. longum XY01和B. longum NCC2705对HeLa细胞均有较强的粘附能力,B. longum XY01在HeLa细胞上的粘附指数为3.79±3.03,明显高于B. longumNCC2705(1.94±1.99)。采用不同梯度pH4-7和pH3-10的胶条进行双向电泳,获得了重复性好、分辨率高的分泌蛋白和全细胞蛋白双向电泳图谱。B. longum XY01分泌蛋白图谱中,成功鉴定出18个蛋白点,代表14种蛋白,多为细胞壁/膜相关蛋白,主要定位在胞质、细胞外、细胞壁上,9个蛋白有信号肽,2个蛋白参与肽多糖生物合成途径;B. longum NCC2705中,成功鉴定出38个蛋白点,代表23种蛋白,多为功能性蛋白,定位于细胞质的蛋白较多,10个蛋白有信号肽,3个蛋白参与糖酵解途径。两菌株的分泌蛋白质与细胞壁/膜的合成、细胞与细胞之间的信号传导、能量产生与转换、营养运输机制及细胞粘附作用等有关。此研究使长双歧杆菌分泌蛋白质的功能信息更加详细,为对长双歧杆菌与宿主相互作用方面的研究提供了基础信息。两菌株全细胞蛋白图谱中,有105个差异蛋白点高丰度表达,共鉴定出98个点,对应76个蛋白,多数为细胞质蛋白,具有生命物质和能量代谢的多种功能,参与半乳糖代谢、糖酵解、嘌呤和嘧啶代谢和次级代谢物质的合成等多种代谢通路中,这些蛋白在B.longum XY01高丰度表达的占大多数;其中,发现4个参与双歧途径相关酶的差异蛋白,6个差异蛋白在B. longum XY01内均参与半乳糖代谢;差异蛋白中重要酶系的变化明显,有力证明了B. longum XY01比B. longum NCC2705生命代谢活动更旺盛,环境适应性更强。特别是B. longum XY01中的Bifid Shunt糖代谢途径,不仅代谢更旺盛,而且能产生大量的代谢产物,尤其是有机酸,这是其在体内发挥益生作用的关键因素。
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