枣（Ziziphus jujuba Mill.）是我国特有果树资源。枣果营养丰富,用途广泛,深受人们喜爱。枣适应性强,抗旱、耐瘠薄、耐盐碱,是适于山区和盐碱地区栽种的理想经济树种。以无核小枣和金丝小枣不同发育时期的果实为试材,建立适宜枣果实总RNA提取的方法及其反转录的技术体系,为进一步进行枣果实cDNA-AFLP分析及有关的分子生物学操作,阐明枣无核突变体的分子机理,并克隆枣果实无核突变体相关基因,通过基因工程培育优良的无核枣品种奠定基础。研究主要内容如下: 1.试验在参照大量总RNA提取方法的基础上,设计了枣果实总RNA的提取方法,即改良SDS法。通过比较改良CTAB法和本试验设计的SDS法对枣果实总RNA的提取结果,发现本研究设计的SDS法提取总RNA的质量更高,效果更好。进一步通过对设计的SDS法优化,即重点研究了最佳试材的用量、无水乙醇和异丙醇沉淀RNA效果的比较、LiCl去除多糖的效果以及LiCl和无水乙醇沉淀RNA先后顺序不同对RNA的影响等方面,确定了枣果实总RNA提取最佳技术体系,该体系提取的枣果实总RNA无降解、无污染,OD₂₆₀/OD₂₈₀为1.8-2.0;OD₂₆₀/OD₂₈₀大于2.0。利用该体系提取了金丝小枣和无核小枣不同时期的果实总RNA。 2.枣果实不同发育阶段RNA含量不同,发育早期阶段RNA含量高。 3.研究了无水乙醇、异丙醇沉淀RNA的效果,确定了最佳沉淀RNA的方法,即2.5倍体积的无水乙醇效果最好。 4.建立了适合枣果实总RNA的纯化技术体系,确定了合适的DNase的用量,即40μL体系中,DNasc的用量为10U。 5.建立了枣果实反转录合成cDNA技术体系。其中,反转录cDNA第一条链体系为:10μL体系中,含有5μL纯化后的RNA,1.625μL Oligo（dT）₁₅,0.125 μL RNA酶抑制剂（40U/μL）,1μL 10mmol/μL dNTPs,2μL 5倍RTase-AMV缓冲液,0.25μL RTase-AMV（10U/μL）; 合成第二条链cDNA体系为:30μL体系中,含有10μL第一条链反应混合物,3μL 10倍DNA聚合酶Ⅰ缓冲液,2μL DNA polymerase I（4U/μL）,1.5μL 10mmol/μL dNTPs,0.5μLRNase H（60U/μL）,3μL 10倍T₄ DNA连接酶缓冲液,0.2μL T₄DNA连接酶,9.8μL ddH₂O。