【摘 要】
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目的:研究环孢素A完全抗原的合成及单克隆抗体制备的方法。方法:室温搅拌条件下,在脱水剂1-乙基-(3-二甲丙胺基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)的作用下,将环孢素A与4-苯甲酰苯甲酸的
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目的:研究环孢素A完全抗原的合成及单克隆抗体制备的方法。方法:室温搅拌条件下,在脱水剂1-乙基-(3-二甲丙胺基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)的作用下,将环孢素A与4-苯甲酰苯甲酸的共轭物(CsA-BBa)与聚L-赖氨酸(PL)按质量比为3.4:1的比例进行反应。反应产物用截留量1万的透析膜透析分离、纯化。在190-300nm范围内对合成抗原进行紫外图谱扫描鉴定;用5μg/ml的抗原包被酶标板,酶联免疫吸附法(ELISA)进行抗原特异性鉴定。用完全抗原免疫七周龄雌性BALB/C小鼠, ELISA法检测免疫小鼠血清抗体效价。在50%聚乙二醇(PEG)的作用下,将高效价小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合(脾细胞:骨髓瘤细胞=10:1)并接种于24 h前准备的饲养层细胞培养板中,HAT培养液对融合细胞进行选择性培养,用ELISA法对杂交瘤细胞进行筛选、鉴定。结果:环孢素A完全抗原(CsA-BBa-PL)紫外吸收峰峰位209.5nm,较合成原料物质CsA-BBa(212nm)及PL(203nm)发生了明显迁移,证实了产物的生成;环孢素A完全抗原ELISA特异性检测结果与阴性对照的比值为23.22。免疫BALB/C小鼠血清效价值为:3.35,3.43,3.37,3.31,3.38,空白对照、阴性对照、阳性对照值依次为0.080、0.42、3.43。免疫小鼠血清效价测定结果明显大于空白对照及阴性对照值,并与阳性对照值接近。所筛选的杂交瘤细胞能够稳定分泌环孢素A单克隆抗体。结论:该实验方法能够有效的合成环孢素A完全抗原;合成抗原能够刺激BALB/C小鼠机体产生免疫应答反应并产生相应环孢素A抗体;实验所采用杂交瘤技术能够成功的制备环孢素A单克隆抗体。
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