非酒精性脂肪性肝病（N on-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）是指一种无过量酒精摄入或遗传易感导致的肝脏实质性的病理学改变,它能够进一步发展为非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、肝硬化、肝细胞癌、肝功能衰竭。研究表明,NAFLD还与多种代谢性疾病密切相关,如中央肥胖、慢性肾脏疾病（CKD）、2型糖尿病（T2DM）、高血压、心血管疾病等。目前,临床上对于NAFLD未引起足够重视,对其发病,诊断预防及治疗尚未达成共识。近年来,有研究表明细胞凋亡可能参与NAFLD的发病进程。细胞凋亡,是一种细胞程序性死亡方式,包括一系列细胞形态结构及功能的改变。NAFLD发病的因素复杂,包括脂代谢紊乱,胰岛素抵抗及氧化应激、内质网应激导致的细胞凋亡及炎症。鞘氨醇激酶通路是基于脂代谢及调控细胞存活与凋亡的信号途径,在NAFLD相关肝纤维化的疾病中有重要作用。在NAFLD治疗及预防中,对于调控脂代谢及干预细胞凋亡的研究研究及临床实验还鲜有报道。因此,迫切需要深入研究在鞘氨醇激酶通路中脂质代谢与凋亡的关系,为研发其相关的药物提供必要的理论依据。迄今为止,临床上尚未有明确的特效药物来治疗NAFLD,所以,寻找能够调控脂肪代谢及细胞凋亡的药物成为医学研究的一大热点。人参皂苷Rg1是从三七及人参中提取的一种四环三帖类化合物,是人参属植物中主要的活性物质。有学者前期研究表明,人参皂苷Rg1可以降低脂质沉积,缓解氧化应激,抑制炎性反应及抗肝细胞凋亡,保护肝功能。基于相关文献报道和课题组前期工作,我们做出这样的科学假设:人参皂苷Rg1可能通过鞘氨醇激酶通路调控脂代谢,影响细胞存活与凋亡,进而缓解NAFLD的发病,但具体机制还有待于我们进行验证。本实验通过建立NAFLD细胞模型,然后给予不同浓度的Rg1进行干预,然后油红O染色,测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,并探究鞘氨醇激酶通路分子m RNA及蛋白表达水平变化;并上调鞘氨醇激酶通路关键基因SGPL-1,即采用慢病毒感染目的细胞,筛选出稳定转染细胞株,再次进行细胞建模,测定相关分子的表达及表型测定,以验证我们的假设与猜想。本课题主要从以下几方面展开:（1）NAFLD细胞模型的建立及给药治疗:采用临床上常用的中长链脂肪乳剂诱导HHL-5肝细胞,以模拟高脂环境;而后给予人参皂苷Rg1进行治疗,用油红O染色鉴定。结果表明,细胞间紧密排列,并呈多边形状;经油红O染色后胞内出现紫红色脂滴,位于细胞膜环边缘;经Rg1治疗后细胞脂滴减少,细胞形态清晰。（2）采用MTS实验来检测人参皂苷Rg1对HHL-5细胞增殖及活力的影响。结果表明,本课题摸索的Rg1浓度在0.2 m M、0.4 m M、0.6m M对细胞增殖均无显著影响。（3）利用流式细胞术检测人参皂苷Rg1对HHL-5细胞周期变化及凋亡的影响。结果显示:Rg1干预后细胞凋亡有所缓解,并且随着Rg1浓度不断增加,细胞凋亡率逐渐减少。同时,Rg1对HHL-5细胞周期无显著影响。（4）人参皂苷Rg1处理HHL-5细胞,并采用RT-PCR及Immuno blot检测鞘氨醇激酶通路相关蛋白的表达。结果表明,Rg1抑制了凋亡调控蛋白BAX、Caspase-3、SGPL-1的表达;使得BCL-2及表达上调,并呈现药物剂量依赖的关系。（5）上调SGPL-1基因,建立HHL-5稳转细胞株,再用Western检测鞘氨醇激酶通路相关蛋白的表达。结果表明,对鞘氨醇激酶通路SGPL-1基因过表达之后,在给予Rg1进行干预后上述表型变化不明显。这提示我们的猜想正确,Rescue的挽救实验也证实了这一点。结论:通过以上实验我们认为:1、用医用静脉注射脂肪乳剂能成功建立NAFLD细胞模型,且较为简便实用。2、人参皂苷Rg1对NAFLD模型细胞增殖无显著影响。3、人参皂苷Rg1抑制了细胞凋亡,其机制可能与鞘氨醇激酶通路促凋亡蛋白Bax下调和抗凋亡蛋白Bcl-2上调有关。4、慢病毒包装后做稳转的细胞活力与正常细胞相比,活力有所下降,可能是过表达的SGPL-1不利于细胞生长。5、人参皂苷Rg1对于过表达的细胞抗凋亡作用不明显,即我们的Rescue表型挽救佐证了Rg1的确通过鞘氨醇激酶通路调控了NAFLD的细胞表型。