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目的:水红花子为国家课题“重大新药创制-中药组分配伍治疗肝癌的新药研究（课题编号2009ZX09103-354）”所选临床经验复方中药味之一,本文以中药水红花子为主要研究对象,采用现代分离分析技术,利用药效组分筛选方法对水红花子中抗肝癌有效化学物质组进行提取、分离纯化;结合体内外药效学试验疗效,筛选水红花子抗癌有效组分;并对其作用机理进行初步研究。通过对水红花子有效抗癌组分较深入的研究,为中药水红花子的开发提供理论和实验依据,为中药组分配伍治疗肝癌的新药研究奠定物质和实验基础。材料与方法:1.采用高效液相色谱法,以水红花子中已知的抗癌有效成分花旗松素、槲皮素的含量和出膏率及体外药效为考察指标,通过单因素考察和L9（34）正交试验,对水红花子的提取工艺进行优选研究。2.采用高效液相色谱法,通过静态实验筛选出纯化水红花子有效成分的大孔吸附树脂,再以动态实验确定大孔吸附树脂对有效物质组分的最佳分离纯化条件。3.采用MTT法,以水红花子有效化学物质组为研究对象,选择人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞,分别观察水红花子有效化学物质组对肝癌细胞生长情况的影响。应用血清药理学方法检测水红花子有效化学物质组含药血清对肝癌细胞的增殖抑制能力。4.采用MTT法,以水红花子抗肝癌有效物质组为研究对象,选取人肝细胞L02,观察其不同作用时间对细胞相对增殖度的影响,确定肝细胞毒性。5.对水红花子有效化学物质组进行急性毒性实验,测出小鼠最大耐受量（MTD）。建立H22小鼠移植性肿瘤模型,用不同剂量水红花子有效化学物质组分别灌胃给药治疗,观察其对肝脏肿瘤生长的影响。6.采用高效液相波长融合色谱法和紫外分光光度法,确定水红花子生药材和水红花子有效化学物质组的质量控制标准。7.采用流式细胞术检测水红花子有效化学物质组对人肝癌细胞SMMC-7721的细胞周期及细胞凋亡的影响,对H22实体瘤组织HE染色切片进行观察,对水红花子肝脏肿瘤作用的机制进行了初步研究。结果:1.以水红花子中花旗松素、槲皮素和出膏率为考察指标,确定水红花子抗肝脏肿瘤有效组分的最佳提取工艺:6倍量60%乙醇加热回流提取3次,每次2 h。2.确定纯化水红花子有效化学物质组的实验用树脂为HPD-300,动态洗脱条件为上样浓度0.4 g /mL,上样PH=4,用70%乙醇以2 mL/min的速度洗脱,收集流份,减压干燥,即得水红花子有效化学物质组。3.水红花子有效化学物质组在0.1251 mg/mL浓度范围内对人肝癌SMMC-7721、HepG2细胞有增殖抑制作用,随着剂量的增加抑制率增大,呈现良好的剂量-时间-效应关系;不同剂量组的水红花子有效化学物质组含药血清均对HepG2及SMMC-7721细胞的增殖具有抑制作用,亦呈良好的剂量-时间-效应关系。水红花子抗肝癌有效物质组作用于人正常肝细胞的毒性评级为1-2级,各组没有明显差异。4.水红花子生药材和水红花子有效化学物质组的质量控制标准各项试验均符合规定。5.水红花子有效化学物质组MTD相当于成人临床日用量的244倍。水红花子有效化学物质组的3个剂量组对H22小鼠实体瘤具有明显地抑制作用,抑瘤率分别为43.82%、49.87%、52.10%。6.流式细胞仪（FCM）检测水红花子有效化学物质组对人肝癌细胞SMMC-7721的细胞周期的影响,不同浓度的水红花子有效化学物质组均可引起SMMC-7721细胞发生S期阻滞现象,从而阻碍细胞进入G2/M期,也对细胞进入G0/G1期的产生了影响。Annexin V-EGFP/PI双染法检测水红花子有效化学物质组对SMMC-772l细胞凋亡作用,水红花子有效化学物质组能诱导SMMC-7721细胞凋亡,且这种诱导效应具有明显的时间一剂量一效应关系。结论:1.筛选的水红花子最佳提取工艺稳定、可行,本实验为充分利用此药材提供了基础资料。2.大孔吸附树脂对水红花子中抗癌成分有较好的纯化效果,HPD-300对水红花子的纯化物有较强的抗肝脏肿瘤活性。3.体内外药效实验证明水红花子有效化学物质组具有良好的抗肝脏肿瘤作用。首次验证了水红花子有效化学物质组抗肝脏肿瘤的药理作用。4.首次利用流式细胞术对水红花子对肝脏肿瘤的细胞周期的影响,对水红花子抗肿瘤的作用机制进行初步探讨。