【摘 要】
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玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗菌。前期研究表明,该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌、黄瓜白粉病菌等多种重要的植物病原真菌具有
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玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗菌。前期研究表明,该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌、黄瓜白粉病菌等多种重要的植物病原真菌具有较强的抑制作用,具有良好的生防应用潜力。通过对玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63进行微波诱变和硫酸二乙酯诱变,已得到了该生防菌的8株抗生素生物合成阻断突变株DE01,DE02,MV11,MV18,MV21,MV22,MV35和MV40。这些突变株对棉花黄萎病菌、马铃薯疮痂病菌、番茄灰霉病菌等病原菌均已失去了抑菌活性,并且传代稳定。本文利用AFLP指纹图谱分析技术对Men-myco-93-63及其8株抗生素生物合成阻断突变株进行了基因组DNA多态性分析。结果表明,38对AFLP引物共产生3142条谱带,其中2362条为多态性谱带,占总带数的75.2%。聚类分析结果表明,Men-myco-93-63及其8株突变株间的遗传相似系数变化范围为0.52～0.88,说明遗传分化较小。它们被分为了两组,Men-myco-93-63与突变株DE01,MV11,MV22,MV35分在了一组,突变株MV21,MV40,MV18和DE02分在了另一组,Men-myco-93-63与DE02的相似性最低。从96对引物中筛选得到了3对引物:E-CA/M-GA,E-GA/M-AC和E-GA/M-AG,分别扩增出254 bp,312 bp和209 bp三条仅在Men-myco-93-63中存在,在8株突变菌株缺失的特异条带,命名为EM254,EM312和EM209.Southern杂交试验表明,特异片段EM254,EM312和EM209都只在Men-myco-93-63的基因组泳道中有杂交信号,且为单拷贝。验证了EM254,EM312和EM209只在Men-myco-93-63中存在,而在其8株抗生素生物合成阻断突变株中缺失。将这3个片段回收、克隆和测序,成功地将其转化为SCAR标记,可以更加方便地用于分子检测,为从分子水平进行突变株的鉴定提供了简便可行的方法。
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